[发明专利]核酸的衔接线性扩增

权利要求书

1、一种用于扩增包含在互补核酸链中的所感兴趣核酸序列的方法，包括：

(a)在一定条件下，将链与包含一个非复制性因子的引物接触，以便以所述的链为模板合成第一代引物延伸产物；其中，链的引物的选择是使在该引物上合成的第一代引物延伸产物在与链分离后，能作为模板用于合成与所述链互补的引物的第二代引物延伸产物；

(b)将第一代引物延伸产物从其相应的模板上分离开从而产生单链分子；和

(c)在一定条件下，将第一代引物延伸产物用(a)步骤的引物处理，从而以第一代引物延伸产物为模板合成第二代引物延伸产物；

其中，第二代引物延伸产物至少包含一部分所感兴趣的核酸序列，并且不能作为延伸后合成其模板的引物合成引物延伸产物的模板。

2、根据权利要求1的方法，进一步包括将第二代引物延伸产物与其相应的模板分离以产生单链分子。

3、根据权利要求1的方法，其中步骤(c)至少被重复一次。

4、根据权利要求1的方法，其中非复制性因子不是位于任何所述引物的末端残基。

5、根据权利要求1的方法，其中非复制性因子是脱氧核糖核苷酸的衍生物。

6、根据权利要求1的方法，其中非复制性因子是核糖核苷酸的衍生物。

7、根据权利要求5的方法，其中非复制性因子是1，3-丙二醇的残基。

8、根据权利要求5的方法，其中非复制性因子是1，4-脱水-2-脱氧-D-核糖醇的残基。

9、根据权利要求1的方法，进一步包括在一定条件下用包含一个非复制性因子的引物处理第二代引物延伸产物，以便利用第二代引物延伸产物作为模板合成引物延伸产物的步骤。

10、一种用于扩增包含在互补核酸链中的所感兴趣核酸序列的方法，包括：

(a)在一定条件下，将链与第一引物和第二引物接触，每个所述的第一引物和第二引物均含有非复制性因子，以便用所述的链为模板由第一引物和第二引物合成第一代引物延伸产物，其中，第一引物和第二引物的选择是使第一代引物延伸产物与其模板分离后，能作为合成第一引物和第二引物的第二代引物延伸产物的模板；

(b)将第一代引物延伸产物与其相应的模板分离，以产生单链分子；以及

(c)在一定条件下，用第一引物和第二引物处理第一代引物延伸产物，从而以第一代引物延伸产物为模板合成第二代引物延伸产物。

其中，第二代引物延伸产物含有至少一部分所感兴趣的核酸序列，第一引物的第二代引物延伸产物能够作为合成第二引物的引物延伸产物的模板。

11、根据权利要求10的方法，进一步包括分离由步骤(c)产生的引物延伸产物从而生成单链分子。

12、根据权利要求10的方法，其中步骤(c)被至少重复一次。

13、根据权利要求10的方法，其中非复制性因子不位于任何所述引物的末端残基。

14、根据权利要求10的方法，其中非复制性因子是脱氧核糖核苷酸的衍生物。

15、根据权利要求10的方法，其中非复制性因子是核糖核苷酸的衍生物。

16、根据权利要求14的方法，其中非复制性因子是1，3-丙二醇的残基。

17、根据权利要求14的方法，其中非复制性因子是1，4-脱水-2-脱氧-D-核糖醇的残基。

18、根据权利要求10的方法，进一步包括在一定条件下，用第三引物处理所述的第二引物的第二代引物延伸产物，每个所述的第三引物含有一个非复制性因子，以便用所述的第二引物的第二代引物延伸产物为模板合成第三引物的引物延伸产物。

19、根据权利要求10的方法，其中每个所述链含有一个第一引物的引物结合位点和一个第二引物的引物结合位点，第一引物的引物结合位点在第二引物的引物结合位点的3’端。