[发明专利]具有抗血栓活性的肽及其制法

权利要求书

1.一种单链肽，其特征在于：此肽是通过如下方式得到的：(1)将来源于蛇毒的二聚或多聚肽分子变性，所述二聚或多聚肽分子由肽链组成，在所述肽链之间具有链间二硫键，在各肽链内具有三个链内二硫键，该分子具有可抑制von Willebrand因子与血小板结合的活性，并且在体内显示所述活性的最小给药量下会造成血小板减少，(2)还原所述链间二硫键，同时保留至少一个链内二硫键，

所述单链肽具有可抑制von Willebrand因子与血小板结合的活性，在体内显示上述活性的最小给药量下不会造成血小板减少。

2.根据权利要求1的肽，其中所述蛇毒是响尾蛇的蛇毒。

3.根据权利要求2的肽，其特征在于在N末端有序列1所示氨基酸。

4.根据权利要求2的肽，它含有序列2所示氨基酸序列，或其至少含有从第67号酪氨酸残基到第115号谷氨酰胺残基的部分氨基酸序列。

5.根据权利要求4的肽，其特征在于它含有序列2中所示氨基酸序列，或其至少含有从第67号酪氨酸残基到第115号谷氨酰胺残基的部分氨基酸序列，其中，在序列2所示氨基酸序列中，在第4号与第15号、第32号与第120号、以及第95号与第112号半胱氨酸残基之间分别有二硫键。

6.根据权利要求4的肽，其特征在于：序列2所示氨基酸序列的第81号半胱氨酸残基被另一种氨基酸取代。

7.一种单链肽的制备方法，所述单链肽可得自来源于蛇毒的二聚或多聚肽分子，所述二聚或多聚肽分子由肽链组成，在所述肽链之间具有链间二硫键，在各肽链内具有三个链内二硫键，该分子具有可抑制von Willebrand因子与血小板结合的活性，并且在体内显示所述活性的最小给药量下会造成血小板减少，所述单链肽具有可抑制von Willebrand因子与血小板结合的活性，并且在体内显示所述活性的最小给药量下不会造成血小板减少，所述方法包括如下步骤：

使所述多聚肽分子与选自谷胱甘肽和/或半胱氨酸的还原剂共存，由此使所述分子变性，并使链间二硫键还原，同时保留至少一个链内二硫键。

8.一种DNA片段，它编码权利要求1～6中任何一项所述的肽。

9.一种DNA片段，它编码序列2中所示氨基酸序列或其一部分。

10.一种重组载体，它是将权利要求8或9所述DNA片段插入适合于转化选自大肠杆菌、昆虫培养细胞和动物培养细胞的宿主细胞的载体中而形成的。

11.一种转化体，它是用权利要求10所述重组载体转化选自大肠杆菌、昆虫培养细胞和动物培养细胞的宿主细胞而形成的。

12.一种在体内显示抑制von Willebrand因子与血小板结合活性的最小给药量下不会造成血小板数量减少的肽的制备方法，该方法包括：

以适当的培养基培养用权利要求10所述重组载体转化的大肠杆菌；

使权利要求1所述肽表达；以及

使积累于大肠杆菌细胞内的上述肽与蛋白质变性剂共存，然后通过除去蛋白质变性剂或减少蛋白质变性剂的浓度，生成上述肽链内的二硫键。

13.根据权利要求12的方法，其特征在于该肽具有序列2所记载的氨基酸序列，或其至少含有从第67号酪氨酸残基到第115号谷氨酰胺残基的部分氨基酸序列，其中至少一个二硫键是在第4号与第15号、第32号与第120号、以及第95号与第112号半胱氨酸残基之间形成的。

14.根据权利要求13的方法，其中所述肽具有序列2所记载的氨基酸序列，其中二硫键是在第4号与第15号、第32号与第120号、以及第95号与第112号半胱氨酸残基之间形成的。

15.一种在体内显示抑制von Willebrand因子与血小板结合的活性的最小给药量下不会造成血小板数量减少的肽的制备方法，该方法包括：

以适当的培养基培养用权利要求10所述重组载体转化的昆虫细胞或动物细胞；

使权利要求1所述肽表达；以及

将积累于上述细胞内或培养基中的上述肽回收。

16.一种医药组合物，它含有作为有效成分的权利要求1～6中任何一项所述的肽和/或其药学上可接受的盐。