[发明专利]抑制编程性细胞死亡的组合物、其纯化方法及其用途

权利要求书

1.制备含有抗编程性细胞死亡活性因子的组合物的方法，其中所述方法包括步骤：

a)用脱脂试剂将植物粉末脱脂；

b)将粉末与脱脂试剂分离；

c)用水溶液提取所述脱脂的粉末；

d)将水溶液与脱脂粉末分离以得到水保留液。

2.权利要求1的方法，其中植物粉末是通过用选自由丙酮、四氯化碳、乙醚、己烷及氯仿组成的有机溶剂提取进行脱脂。

3.权利要求1的方法，其中植物粉末得自植物的任意部分。

4.权利要求3的方法，其中植物部分是储存器官。

5.权利要求4的方法，其中储存器官选自块茎、种子及球茎。

6.权利要求1的方法，其中植物粉末得自豆科、茄科及葱科的植物。

7.权利要求6的方法，其中植物粉末得自豌豆或黄豆种子。

8.权利要求6的方法，其中植物粉末得自马铃薯块茎。

9.权利要求1的方法，其中所述水溶液含有一种或多种与水混溶的有机溶剂，其浓度最高达溶液的80％。

10.权利要求1的方法，其中所述水溶液是缓冲盐水溶液。

11.权利要求10的方法，其中所述水溶液是磷酸盐水缓冲液。

12.权利要求9的方法，其中所述与水混溶的有机溶剂选自乙腈、低级链烷醇(特别是C₁-C₄链烷醇)、低级链烷二醇、C₂-C₄链烷二醇及低级二醇的聚合物。

13.权利要求12的方法，其中所述与水混溶的有机溶剂是乙醇。

14.权利要求13的方法，其中乙醇的浓度是50％。

15.权利要求9的方法，其中进一步包括除去残留的与水混溶的有机溶剂的步骤。

16.权利要求15的方法，其中除去残留的与水混溶的有机溶剂步骤是通过透析、超滤或冻干的方法。

17.权利要求1的方法，其中进一步包括沉淀除去水保留液中杂质的步骤。

18.权利要求1的方法，其中进一步包括通过对水溶液进行筛析凝胶过滤色谱将水溶液中的组合物与其它组份分离的步骤。

19.权利要求18的方法，其中所用色谱试剂选自Sepharose及BioGel。

20.权利要求19的方法，其中所用色谱试剂是SepharoseS100HR。

21.权利要求18的方法，其中使用色谱缓冲液并且它选自含有0.1至0.3M碳酸氢铵或0.1至0.3M氯化钠及10至50mM pH中性磷酸盐的一组缓冲液。

22.权利要求21的方法，其中色谱缓冲液含有0.1M碳酸氢铵。

23.权利要求18的方法，其中提取段得自凝胶过滤色谱且收集并储存在280nm有最强吸收的部分。

24.权利要求18的方法，其中提取段得自凝胶过滤色谱且收集并储存分子量大于80kD的部分。

25.权利要求24的方法，其中提取段得自凝胶过滤色谱且将含有所述组合物的部分通过透析及冻干纯化并浓缩。

26.权利要求25的方法，其中进一步包括用有机溶剂和水的单相混合物提取水保留液的步骤，以得到含有所述组合物的水相及有机相。

27.权利要求26的方法，其中进一步包括将水保留液冻干的步骤。

28.权利要求27的方法，其中进一步包括步骤：

a)用有机溶剂和水的单相混合物提取冻干的物质；及

b)通过分离提取混合物中的不溶物质将含糖脂及磷脂的部分分离。

29.权利要求28的方法，其中有机溶剂和水的单相混合物含有氯仿、甲醇和水。

30.权利要求29的方法，其中氯仿、甲醇及水的比率是4∶8∶3。