[发明专利]制备硫醚轭合物的方法

权利要求书

1、制备下式结构的硫醚轭合物的方法，

其中n是约1～10的整数，

q是4～10，

MAb是一种免疫球蛋白，它是松弛嵌合型BR96抗体、BR96抗体、嵌合型BR96抗体或松弛型BR96抗体、或其抗原结合片段；

该方法包括：在第一种方法中，

(a)提供式MAb-(SH)_6-9结构的还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲的溶液，其中含有pH为约6～9的磷酸盐缓冲液，

(b)在惰性气氛下透滤该还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液，制得已透滤的溶液，

(c)在惰性气氛下使所述免疫球蛋白硫醚的已透滤溶液与下式结构的阿霉素腙的溶液反应，生成硫醚轭合物粗品，

其中n如上所定义，

(d)纯化该硫醚轭合物；

或者该方法包括：在第二种方法中，

(a)提供结构式为

的免疫球蛋白硫醚的透滤的磷酸盐缓冲溶液，所说溶液的pH为约6～9，

(b)在惰性气氛下用还原剂的磷酸盐缓冲溶液处理所述的免疫球蛋白硫醚的磷酸盐缓冲溶液，生成结构式为

的还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液，

(c)在惰性气氛下使所述还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液与下式结构的阿霉素腙溶液反应，生成硫醚轭合物粗品，

其中n如上所定义，

(d)纯化硫醚轭合物。

2、根据权利要求1的方法，其中在第一种方法中所述的还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液制备如下：

（a）提供结构式为

的免疫球蛋白硫醚的柠檬酸盐缓冲溶液，所述的柠檬酸盐缓冲液的pH值范围为约4～6;

（b）用pH为约6～10的磷酸盐缓冲液处理所述的缓冲的免疫球蛋白硫醚，制得pH为约6～9的免疫球蛋白硫醚缓冲溶液，

（c）在惰性气氛下，用还原剂的磷酸盐缓冲溶液处理所述的缓冲的免疫球蛋白硫醚，形成还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液。

3、根据权利要求1的方法，其中n为5并且MAb是松弛嵌合型BR96抗体。

4、根据权利要求2的方法，其中还原剂是二硫苏糖醇。

5、根据权利要求2的方法，其中在约25～45℃的温度下，在氩气氛中将缓冲的免疫球蛋白硫醚与缓冲的还原剂间的反应进行约1～5小时。

6、根据权利要求1的方法，其中在约-5～25℃下，在氩气氛中进行还原型免疫球蛋白硫醚的缓冲溶液的透滤。

7、根据权利要求1的方法，其中在约-5～25℃的温度下，在氩气氛中将已透滤的免疫球蛋白硫醚溶液与阿霉素腙间的反应进行约10～60分钟。

8、根据权利要求2的方法，其中采用的还原剂与免疫球蛋白硫醚的摩尔比率为约10∶1～5∶1。

9、根据权利要求1的方法，其中还原型免疫球蛋白硫醚与阿霉素腙的摩尔比率为约1∶4～1∶11。

10、根据权利要求1的方法，其中相对于还原型免疫球蛋白硫醚的每当量巯基，使用阿霉素腙的量为约1.0～1.5当量。

11、根据权利要求2的方法，其中柠檬酸盐缓冲盐水含有：约10mM～75mM柠檬酸钠和约50mM～500mM氯化钠，pH为约5～6.5。

12、根据权利要求2的方法，其中磷酸盐缓冲液是碱金属磷酸盐缓冲液。

13、根据权利要求2的方法，其中磷酸盐缓冲盐水含有：约0.005M～0.02M磷酸钠和约0.05M～0.2M氯化钠，并且pH为约7～8。