[发明专利]制备硫醚轭合物的方法

说明书

将细胞毒剂与抗体相连接的双官能化合物是公知的。在介导抗与肿瘤相关的抗原的免疫轭合物的形成中这些化合物一直是特别有用的。这些免疫轭合物可使有毒性的药物选择性释放至肿瘤细胞。参见例如Hermentin和Seiler，“Investigations  With  Monoclonal  Antibody  Drug  Conjugates，”Behring  Insti.Mitl.82：197-215（1988）;Gallego等人.，“Preparation  of  Four  Daunomycin-Monoclonal  Antibody  791T/36  Conjugates  With  Anti-Tumor  Activity”.Int.J.Cancer  33：737-744（1984）;Arnon等人，“In  Vitro和In  Vivo  Efficacy  of  Conjugates  of  Daunomycin  With  Anti-Tumor  Antibodies，”Immunological  Rev.62∶5-27（1982）.

Greenfield等人最近描述了含有酰基肼化合物即3-（2-吡啶基-联硫基）丙酰肼的酸敏感的免疫轭合物的形成，所述酰基肼化合物经酰基腙键轭合至蒽环型药分子的13-酮位，并且描述了该蒽环型药衍生物与抗体分子的轭合作用（Greenfield等人，欧洲专利公告EP    0    328    147，1989年8月16日出版，该专利相应于1988年11月16日提交的未决美国专利申请第07/270，509号和1988年2月11日提交但现已放弃的美国专利申请第07/155，181号）。后一参考文献还公开了具体的含有硫醚的连接物和轭合物，包括含有腙硫醚的免疫轭合物。

Kaneko等人（1990年5月14日提交的美国专利申请第07/522，996号，它是1991年11月21日出版的欧洲专利公告EP    A    0    457    250的等同专利）描述了含有蒽环型抗生素的轭合物的形成，该蒽环型抗生素通过蒽环型药分子C-13位上的酰基腙键与双官能连接物相结合。在Kaneko等人的发明中，连接物含有活性吡啶基联硫基或邻硝基苯基联硫基，通过这些基团，连接物与结合在细胞活性配位体上的合适基团反应，形成完整的轭合物。

D.Willner等人1992年1月23日提交的美国专利申请第824，951号（该专利并入本文作为参考）公开了用酸敏感的连接键将治疗上活性药物分子与能识别选定的靶细胞群的配位体相连接，制备治疗上活性轭合物的方法。

按Willner等人的方法形成的轭合物具有通式（I）的结构：

其中D是药物部分，

n是1～10，

p是1～6，

Y是O或NH⁺₂Cl^-，

z是0或1，

q是约1～10，

x是配位体，和

A是迈克尔加成加合物部分。

在其优选的实施方案中，药物（蒽环型化合物，优选阿霉素）经蒽环型化合物13-酮位上的酰基腙键键合至轭合物的连接物部分。配位体（还原型抗体，优选嵌合型BR96抗体）然后通过连接物（优选马来酰亚氨基）与蒽环型化合物结合。尤其优选的实施方案中，连接键经还原的二硫基（即抗体上游离的巯基（-SH）形成。

按照上述Willner等人的美国专利申请所述，在优选的制备上述轭合物的方法中，配位体MAb-（SH）₈上的巯基直接与式（Ⅱb）中间体的迈克尔加成受体（Michael Addition Receptor）反应，

生成最终的轭合物（Ⅰa），

使用该方法，每一配位体一般可与约1～10个药物分子相连接。因此，式（Ⅰa）中q可以是约1～10。

如Willner等人的美国专利申请所述，依据所用的迈克尔加成受体部分，以方法A中所述的通用方法，使药物（或衍生的药物）与含有迈克尔加成受体的酰肼反应，可以制备式（Ⅱb）的含有腙类药物衍生物的中间体迈克尔加成受体。

方法A

其中D是阿霉素，R是马来酰亚胺部分。

例如使用可用于所述目的的还原剂，例如二硫苏糖醇（“DTT”），通过还原天然分子（Ⅱ）中的二硫键，可以产生含有巯基的配位体（Ⅲ）（MAb-（SH）₈）。