[发明专利]一种制造重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子的方法

权利要求书

1、一种利用基因工程技术制造重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子的方法，其特征在于用PCR方法对人粒-巨噬细胞集落刺激因子cDNA的改构，获得的cDNA核苷酸序列为

ATGGCACCAG    CACGTTCTCC    ATCTCCGTCT

ACTCAGCCCT    GGGAGCATGT    GAATGCCATC

CAGGAGGCCC    GGCGTCTCCT    GAACCTGAGT

AGAGACACTG    CTGCTGAGAT    GAATGAAACA

GTAGAAGTCA    TCTCAGAAAT    GTTTGACCTC

CAGGAGCCGA    CCTGCCTACA    GACCCGCCTG

GAGCTGTACA    AGCAGGGCCT    GCGGGGCAGC

CTCACCAAGC    TCAAGGGCCC    CTTGACCATG

ATGGCCAGCC    ACTACAAGCA    GCACTGCCCT

CCAACCCCGG    AAACTTCCTG    TGCAACCCAG

ACTATCACCT    TTGAAAGTTT    CAAAGAGAAC

CTGAAGGACT    TTCTGCTTGT    CATCCCCTTT

GACTGCTGGG    AGCCAGTCCA    GGAGTAA

或者

ATGGCACCGG    CTCGTTCTCC    ATCTCCGTCT

ACTCAGCCCT    GGGAGCATGT    GAATGCCATC

CAGGAGGCCC    GGCGTCTCCT    GAACCTGAGT

AGAGACACTG    CTGCTGAGAT    GAATGAAACA

GTAGAAGTCA    TCTCAGAAAT    GTTTGACCTC

CAGGAGCCGA    CCTGCCTACA    GACCCGCCTG

GAGCTGTACA    AGCAGGGCCT    GCGGGGCAGC

CTCACCAAGC    TCAAGGGCCC    CTTGACCATG

ATGGCCAGCC    ACTACAAGCA    GCACTGCCCT

CCAACCCCGG    AAACTTCCTG    TGCAACCCAG

ACTATCACCT    TTGAAAGTTT    CAAAGAGAAC

CTGAAGGACT    TTCTGCTTGT    CATCCCCTTT

GACTGCTGGG    AGCCAGTCCA    GGAGTAA，

获得重组质粒以及对此工程菌进行表达，经离心、洗涤液洗涤、回收包含体、尿素溶解、稀释复性液中复性，经Q-Sepharose FF和Sephacryl S-200层析柱纯化，分步收集可得重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子纯品。

2.依据权利要求1所述之方法，其特征在于离心转速为4000～12,000rpm，时间为15～25分钟。

3.依据权利要求1所述之方法，其特征在于洗涤液中含有0～2M尿素、10～50mM Tris-HCl或磷酸盐缓冲液，PH值8～9。

4.依据权利要求1所述之方法，其特征在于稀释复性液中含有二硫苏糖醇和氧化性谷胱甘肽，其浓度分别为0.01～2mM和0.01～2mM。

5.依据权利要求1所述之方法，其特征在于Q-Sepharose FF层析柱纯化过程中洗脱重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子洗脱液为含有0.3～1M NaCl、pH6.5～8.5的Tris-HCl或磷酸盐缓冲液。