[发明专利]一种微生物及其OS-植物调理素无效
申请号: | 95107909.3 | 申请日: | 1995-07-31 |
公开(公告)号: | CN1067718C | 公开(公告)日: | 2001-06-27 |
发明(设计)人: | 王士奎;李延云;祁雅琴;肖明松;白云龙;聂宇燕;丁素珍;赵焕明 | 申请(专利权)人: | 中国农业工程研究设计院 |
主分类号: | C12N1/00 | 分类号: | C12N1/00;A01N63/02 |
代理公司: | 农业部专利事务所 | 代理人: | 陈如明 |
地址: | 100026*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 微生物 及其 os 植物 调理 | ||
本发明涉及一种微生物及其微生物代谢物的提取方法。
聚氨基糖在自然界中主要以几丁质和脱乙酰几丁质的形式存在。业已发现,一定分子量的脱乙酰几丁质(1~10万)和低聚氨基糖素即氨基寡糖素具有显著的生物学功能,主要作用在于:(1)植物细胞活化因子,在基因水平上有效地调节植物基因的关闭和开放,其刺激效应的用量是现有激素的1/10~1/100,(2)抗性诱导因子,脱乙酰几丁质属于众多植物致病性真菌的细胞壁类似物,所以一定分子量的脱乙酰几丁质可替代真菌非专一性地刺激植物分泌抗性酶(几丁质酶),达到提高植物免疫力,增强植物对真菌病害抗病能力的目的。目前,获得不同分子量脱乙酰几丁质和氨基寡糖素的主要手段是酶解法和酸解法,其主要缺点是酶解法成本高,不适于一步法直接降解,且降解效率低;酸解法其反应条件剧烈,工艺较难控制,后处理工艺复杂,收率较低。
本发明的目的是一步法直接利用菌体降解脱乙酰几丁质形成不同分子量的聚氨基糖和寡糖素的方法,进而研制出适合于农业生产应用的新型生物制剂-OS-植物调理素,该方法采用微生物发酵工程技术,可工业化生产OS-植物调理素。
本发明的主要技术内容:
将白僵菌Beauveria spp的一菌株,通过高能电子-紫外线复合物理因子诱变处理,进行初筛和复筛,最后获得Bs-6菌株,该菌株已保存在中国专利局指定的保藏单位(中国专利局普通微生物保藏中心)其保藏登记号为CGMCC №0233。
Bs-6菌株在下述CN-5诱导培养基上继代培养,培养条件为:25~32℃,培养7~10天。保存条件为:在下述CN-1培养基上4~8℃橡皮塞封口保存。
CN-5诱导培养基组成成份(mg/L)
脱乙酰几丁质 1000~5000
蛋白胨 1000
RCl 800
NaCl 500
KH2PO4 500
MgSO4 500
Mn5O4·4H20 10
CuSO4·5H2O 10
ZnSO4·7H2O 10
FeSO4·7H2O 10
葡萄糖 1000~1000
琼脂 15000~25000
pH 4.0~6.0
CN-1培养基组成成份(mg/L)
土豆浸汁 1000ml
蛋白胨 1000
葡萄糖 5000~20000
C-R 1000
琼脂 20000
本发明一步降解脱乙酰几丁质生产工艺流程:
(1)按CN-5培养基的配方组成配制生长培养基斜面,将Bs-6菌株活化后接入CN-5培养基斜面,25~32℃培养7~10天,观察到斜面布满分生孢子后即可。
(2)按CN-1培养基的配方组成,配制CN-1茄瓶培养基,方法为:取1000~2000ml茄瓶,每瓶装入CN-1培养基200~500ml,1.1~1.2k9/cm2压力下高温消毒15~20分钟,冷却即成茄瓶CN-1固体培养基。在超净工作台上将Bs-6菌种均匀涂布在茄瓶CN-1固体培养基上,25~32℃培养7~14天,当孢子布满茄瓶后,室温保存。
(3)将(2)中得到的培养物2~3瓶,转入5升种子罐中,罐中含下述CN-2活化培养基3升,通气培养24小时,培养温度25~32℃,待孢子充分萌发后,进入下步操作。
CN-2活化培养基组成成份(mg/L)
蛋白胨 1000~10000
葡萄糖 1000~10000
(4)将(3)中得到的培养物转300升种子罐中,其中含200升下述CN-3种子培养基,28~32℃通气培养63~72小时,通气量为0.5∶1∶1。
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