[发明专利]一种微生物及其OS－植物调理素

说明书

本发明涉及一种微生物及其微生物代谢物的提取方法。

聚氨基糖在自然界中主要以几丁质和脱乙酰几丁质的形式存在。业已发现，一定分子量的脱乙酰几丁质(1～10万)和低聚氨基糖素即氨基寡糖素具有显著的生物学功能，主要作用在于：(1)植物细胞活化因子，在基因水平上有效地调节植物基因的关闭和开放，其刺激效应的用量是现有激素的1/10～1/100，(2)抗性诱导因子，脱乙酰几丁质属于众多植物致病性真菌的细胞壁类似物，所以一定分子量的脱乙酰几丁质可替代真菌非专一性地刺激植物分泌抗性酶(几丁质酶)，达到提高植物免疫力，增强植物对真菌病害抗病能力的目的。目前，获得不同分子量脱乙酰几丁质和氨基寡糖素的主要手段是酶解法和酸解法，其主要缺点是酶解法成本高，不适于一步法直接降解，且降解效率低；酸解法其反应条件剧烈，工艺较难控制，后处理工艺复杂，收率较低。

本发明的目的是一步法直接利用菌体降解脱乙酰几丁质形成不同分子量的聚氨基糖和寡糖素的方法，进而研制出适合于农业生产应用的新型生物制剂-OS-植物调理素，该方法采用微生物发酵工程技术，可工业化生产OS-植物调理素。

本发明的主要技术内容：

将白僵菌Beauveria spp的一菌株，通过高能电子-紫外线复合物理因子诱变处理，进行初筛和复筛，最后获得B_s-6菌株，该菌株已保存在中国专利局指定的保藏单位(中国专利局普通微生物保藏中心)其保藏登记号为CGMCC №0233。

B_s-6菌株在下述CN-5诱导培养基上继代培养，培养条件为：25～32℃，培养7～10天。保存条件为：在下述CN-1培养基上4～8℃橡皮塞封口保存。

CN-5诱导培养基组成成份(mg/L)

脱乙酰几丁质        1000～5000

蛋白胨              1000

RCl                 800

NaCl                500

KH₂PO₄           500

MgSO₄              500

Mn5O₄·4H₂0            10

CuSO₄·5H₂O            10

ZnSO₄·7H₂O            10

FeSO₄·7H₂O            10

葡萄糖                 1000～1000

琼脂                  15000～25000

pH                      4.0～6.0

CN-1培养基组成成份(mg/L)

土豆浸汁    1000ml

蛋白胨      1000

葡萄糖      5000～20000

C-R         1000

琼脂        20000

本发明一步降解脱乙酰几丁质生产工艺流程：

(1)按CN-5培养基的配方组成配制生长培养基斜面，将B_s-6菌株活化后接入CN-5培养基斜面，25～32℃培养7～10天，观察到斜面布满分生孢子后即可。

(2)按CN-1培养基的配方组成，配制CN-1茄瓶培养基，方法为：取1000～2000ml茄瓶，每瓶装入CN-1培养基200～500ml,1.1～1.2k9/cm²压力下高温消毒15～20分钟，冷却即成茄瓶CN-1固体培养基。在超净工作台上将B_s-6菌种均匀涂布在茄瓶CN-1固体培养基上，25～32℃培养7～14天，当孢子布满茄瓶后，室温保存。

(3)将(2)中得到的培养物2～3瓶，转入5升种子罐中，罐中含下述CN-2活化培养基3升，通气培养24小时，培养温度25～32℃，待孢子充分萌发后，进入下步操作。

CN-2活化培养基组成成份(mg/L)

蛋白胨    1000～10000

葡萄糖    1000～10000

(4)将(3)中得到的培养物转300升种子罐中，其中含200升下述CN-3种子培养基，28～32℃通气培养63～72小时，通气量为0.5∶1∶1。