[发明专利]一种检测7S胶原的方法及其试剂盒

权利要求书

1、一种检测7S胶原的方法，其中包括用标准品同步对比操作作出放射性浓度标准曲线，计算待测标本放射性相对值后在标准曲线上查出相应浓度值，其特征在于在未知量标本中加入一定量7S胶原，再加入碘标记7S胶原(¹²⁵I-7S)，使之与所剩的7S胶原结合，再用第一抗体即兔抗人7S胶原血清、第二抗体即羊抗兔血清将7S胶原沉淀下来，测其放射活性，抗7S胶原血清所结合的¹²⁵I-7S与标本中的7S胶原含量呈负相关。

2、根据权利要求1所述的检测7S胶原的方法，其特征在于其具体操作程序为：

(2.1)向塑料放免试管中加入恒量兔抗人7S胶原血清；

(2.2)加入等体积7S胶原标准品或待检标本，混匀，4℃过夜；

(2.3)加入恒量碘标记7S胶原(¹²⁵I-7S)，混匀，4℃，1.0小时；

(2.4)加入恒量第二抗体即羊抗兔血清，混匀，4℃，1.0-2.0小时；

(2.5)在3000转/分离心操作15分钟，弃上清，测沉淀物放射性；

(2.6)将测定的7S胶原标准品各浓度放射性与0管(即浓度为0ng/ml的一管)放射性的比值B/BO作出B/BO浓度标准曲线，计算待测标本B/BO值，得出相应的浓度值。

3、根据权利要求2所述的检测7S胶原的方法，其特征在于所说的7S胶原标准品的制备步骤为：

(1)在酸性条件下用胃蛋白酶有限消化法自人胎盘中粗提出各型胶原成份(I、III、IV、V、VI型混合胶原)；

(2)运用酸性及中性条件下不同氯化钠浓度逐级反复沉淀、分离IV型胶原，获得IV型胶原粗制品；

(3)将粗制IV型胶原经DEAE52柱层析后，采用粗制细菌性胶原酶20℃消化20小时，然后经Sephacryl S-300分子筛柱层析，第二洗脱峰即为7S胶原；

(4)将7S胶原用0.1mol/L醋酸透析，冰冻干燥，-40℃冻存。

4、根据权利要求2所述的检测7S胶原的方法设计的试剂盒，其特征在于其组成为：

(4.1)7S胶原标准品，其浓度分别为0、40、80、160、320、640纳克/毫升，共6瓶，以0.1mmol/L的醋酸配制，PBS透析；

(4.2)抗7S胶原血清(第一抗体)1瓶；

(4.3)碘标记7S胶原(¹²⁵I-7S)1瓶；

(4.4)羊抗兔血清(固相，第二抗体)1瓶。