[发明专利]DNA分离、分级分离和分析方法及其系统

权利要求书

1.DNA分离和分级分离方法，其包括：

i)制备检测板的操作步骤，所说的检测板中DNA探针被固定在用于每种选择性序列的固相表面上——所说的DNA探针包括有寡聚体，该寡聚体含有所有探针共有的序列和3’末端上用于选择片段的1至3个碱基的选择性序列，或者将探针滞留在分有间隔的容器中的操作步骤；

ii)使多个DNA片段与所说的DNA探针杂交的操作步骤；

iii)通过DNA聚合酶反应只延伸DNA探针来稳定DNA探针与所说的DNA片段间之杂交体的操作步骤，所说的DNA探针中在已知序列后的DNA探针3’末端侧的选择性序列互补于所说的DNA片段相对应的序列部分；以及

iv)通过在操作步骤iii)后的加热处理，根据杂交体稳定性的差异来分离和分级分离特异性DNA片段的操作步骤。

2.DNA分离和分级分离方法，其包括：

i)使具有已知序列的寡聚体与多个DNA片段在3’末端上结合的操作步骤；

ii)制备固相如检测板或小珠的操作步骤，其中将包含寡聚体的DNA探针固定在分别用于每种选择序列的固相表面上——所说的寡聚体含有与已知序列互补的序列和包括3’末端侧之1至3个碱基的碱基选择性序列，或者将其保持在带有分隔的容器内的操作步骤；

iii)使用固定步骤ii)中得到之DNA探针的固相，使步骤i)中得到的DNA片段与所说固相上寡聚体杂交的操作步骤；

iv)通过只延伸DNA探针来稳定DNA探针与步骤i)中得到的DNA片段间之杂交体的操作步骤，其中所说的DNA探针中在互补于已知序列的序列之后是DNA探针3’末端侧上的选择性序列；以及

v)根据在步骤iv)后的加热处理期间杂交体稳定性的差异来分离和分级分离特异性DNA片段的操作步骤。

3.DNA分析方法，其包括在完成权利要求2的所有操作步骤后，经扩增，或者没有扩增已分离和分级分离的特异性DNA片段的拷贝数目，分析已经分离和分级分离之DNA片段的DNA序列的操作步骤。

4.根据权利要求1的DNA分析方法，其包括在步骤ii)之前用限制性酶消化靶DNA序列，以制备所说的多个DNA片段的步骤i’)。

5.DNA分析方法，其包括在完成权利要求4的所有步骤之后，经扩增，或没有扩增已分离和分级分离之特异性DNA片段的拷贝数目，分析已分离和分级分离之DNA片段的DNA序列的操作步骤。

6.根据权利要求2的DNA分离和分级分离方法，其进一步包括：

v’)经加热步骤1)中制得的DNA片段和固相层上所说DNA探针间的杂交体，解离没有经受互补链延伸的杂交体的操作步骤，在完成步骤iv)后步骤v)时发生所说步骤；

iv)降低杂交体和步骤v’)中得到的DNA片段的温度，以及固相层上没有杂交的DNA探针的混合物的温度，重复步骤iii)、iv)和v’)的步骤；以及

vii)在完成步骤iv)后用PCR方法扩增特定DNA片段，以及将处理中使用的具有与已知序列互补之序列的寡聚体加到混合物中以分离和分级分离它们的操作步骤。

7.根据权利要求1的DNA分离和分级分离方法，其包括在步骤ii)之前或步骤iv)之后，经凝胶电泳分离和分级分离DNA片段的操作步骤。

8.根据权利要求2的DNA分离和分级分离方法，其包括在操作步骤iii)之前或步骤v)之后经凝胶电泳分离和分级分离DNA片段的操作步骤。

9.根据权利要求2的DNA分离和分级分离方法，其中步骤i)中所说的DNA探针是荧光团标记的。

10.根据权利要求3的DNA分析方法，其中分析所说的DNA序列的步骤是一种凝胶电泳方法。

11.根据权利要求5的DNA分离方法，其中分析所说DNA序列的步骤是一种凝胶电泳方法。