[发明专利]转染动物细胞的重组DNA病毒载体

权利要求书

1.一种转染动物细胞的重组腺病毒载体，它包括启动子、重组酶基因和poly(A)序列，其中所述载体包含E1A基因区缺失。

2.按照权利要求1的重组腺病毒载体，其中所述重组酶基因是得自E.Coli P1噬菌体的重组酶Cre基因。

3.一种转染动物细胞的重组腺病毒载体，它包括两个重组酶识别序列、在所述动物细胞中可操作的复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列，所述复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列都位于两个重组酶识别序列之间，其中所述载体包含E1A基因区缺失。

4.按照权利要求3的重组腺病毒载体，其中所述复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列依此顺序位于两个重组酶识别序列之一的上游。

5.按照权利要求3的重组腺病毒载体，其中所述外源基因、poly(A)序列、复制起点、和启动子依此顺序位于两个重组酶识别序列之一的上游。

6.按照权利要求3-5之任一的重组腺病毒载体，其中所述重组酶识别序列是编码loxP的DNA序列，它是重组酶Cre的底物。

7.按照权利要求3-6之任一的重组腺病毒载体，其中所述复制起点来自病毒或动物细胞。

8.按照权利要求7的重组腺病毒载体，其中所述复制起点选自乳多空病毒、疱疹病毒、腺病毒、痘病毒和细小病毒的复制起点。

9.按照权利要求1-8之任一的重组腺病毒载体，其中所述启动子和poly(A)包含在一杂合启动子CAG中，后者包括巨细胞病毒增强子、鸡β-肌动蛋白启动子、和兔β-珠蛋白缝接受体和poly(A)序列。

10.一种体外向动物细胞包括人细胞中转导外源基因的方法，其包括下列步骤：

用含启动子、重组酶基因和poly(A)序列的具有E1A基因区缺失的重组腺病毒载体，和含有两个重组酶识别序列、在所述动物细胞中可操作的复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列的具有E1A基因区缺失的重组腺病毒载体共转染动物细胞，所述复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列位于两个重组酶识别序列之间；

切下含有所述复制起点、启动子、外源基因和poly(A)序列的DNA片段，形成环形DNA分子；及

所述环形DNA分子在共转染的动物细胞中自主复制。

11.一种体外向细胞中转导人基因的方法，其包括在基因治疗中使用权利要求10的转染方法。