[发明专利]幼龄动物胸腺生长因子及其提取分离方法无效

专利信息
申请号: 95117657.9 申请日: 1995-10-20
公开(公告)号: CN1149057A 公开(公告)日: 1997-05-07
发明(设计)人: 陈光明;杨富强;王东晓 申请(专利权)人: 中国人民解放军第四五八医院
主分类号: C07K14/475 分类号: C07K14/475
代理公司: 北京元中专利事务所 代理人: 汪诚芝
地址: 510062 *** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 幼龄 动物 胸腺 生长因子 及其 提取 分离 方法
【权利要求书】:

1.一种幼龄动物胸腺生长因子,其特征在于该幼龄动物胸腺生子因子是一种用超滤法从健康幼龄动物(乳猪、乳牛或其它幼龄动物)的新鲜胸腺中提取的具有生物活性的中小分子胸腺蛋白混合物,其分子量小于60KD。

2.按权利要求1所述的幼龄动物胸腺生长因子,其特征在于经Gradi FracTM柱层析系统纯化采用紫外监测方法可以收集到W1,W2,W3,W4.W5,W6,W7,W8,W9九个组合峰,

3.按权利要求1所述的幼龄动物胸腺生长因子,其特征在于经Gradi FracTM柱层析系统纯化收集到的9个组份峰,经用PAGE-SDS凝胶电泳测定分子量表明:(1)提取原液有7条电泳带,分子量分别为12.0KD,16.0KD,23.0KD,31.0KD,33.0KD,40.0KD,55.0KD;(2)组份1有6条电泳带,分子量分别为12.0KD,16.0KD,31.0KD,33.0KD,40.0KD,55.0KD;(3)组份2和组份3各有1条电泳带,分子量均为33.0KD;(4)组份4和组份5各有2条电泳带,分子量均为31.0KD和55.0KD:(5)组份6和组分7各有3条电泳带,其分子量均为23.0KD,31.0KD和55.0KD。

Gradi FracTM纯化后各组份电泳带分布图

4.幼龄动物胸腺生长因子的提取分离方法,其特征在于提取方法如下:

提取:

取健康幼龄动物(乳猪,乳牛或其它幼龄动物)的新鲜胸腺(离体6小时之内),磨碎成匀浆,经FP2000型分离桂分离收集分离外液,浓缩冻干成幼龄动物胸腺生长因子冻干粉。

5.按权利要求4所述的幼龄动物胸腺生长因子的提取分离方法,其特征在于纯化分离方法如下:

将权4所示方法提取的幼龄动物胸腺生长因子冻干粉(蛋白浓度为15-20mg/ml)的水溶液,使用pharmacia快速蛋白液相色谱仪(FPLC,LCC-500,P-500泵,MV-7进样器,UV280nm检测系统,0.5UAFS阴离子交换桂Mono QHR5/5)对其胸腺生长因子冻干粉(蛋白浓度为15-20mg/ml的水溶液)进行纯化,加样量0.5ml/次,NaCl非线性梯度洗脱,洗脱A液:20mmol/l Tris-HCI,pH8.0,洗脱B液:20mmol/l Tris-HCI,1.0mol/l NaCl,pH8.0,洗脱速度为1ml/min使B液在0-60%之间为线性梯度,运行22min,B液在100%时洗脱5min,整个洗脱在32min完成,在280nm紫外检测进行峰收集,每个峰作为一组份收集,分别收集各洗脱峰,收集的样品用双蒸水透析(18-24h)去盐,低温干燥,最好是,真空冷冻干燥。

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