[发明专利]中空微胶囊的制备

说明书

本发明涉及中空蛋白微胶囊的制备。这些微胶囊的用途之一是增强超声波成像。

一段时间以来，已知人体内的气泡能用于回波心力记录器。

WO92/18164公开了喷雾干燥一种成壳材料的溶液，材料优选蛋白质如白蛋白，来形成微胶囊。在WO94/08627中述及，当把溶液喷入加热室时，降低压力，以形成更大的微胶囊，或往被喷注的溶液中加入表面活性剂，来增加血流中微胶囊的半寿命，或通过把微胶囊悬浮在一带电化合物的溶液中，将微胶囊导向体内被选定的部位。

US-A-4420442(Sands；PQ Corpn)公开了在喷雾干燥悬浮液，形成中空微胶囊之前，往成膜固体的分散液中加入有机溶剂，但是溶剂(例如溶纤剂或二甘醇二甲醚)比水难挥发。

我们现在已发现，往被喷雾干燥的水溶液中加入一种挥发性的化合物，能高产率形成具有改良性质的微胶囊，并且尺寸分布更窄，壳更薄。

本发明的一个方面是提供一种形成微胶囊的方法，包括：(ⅰ)提供一种含水溶剂中水溶性物质的溶液；(ⅱ)将上述溶液喷入一气体中，则水溶剂蒸发，因此形成中空微胶囊，其特点是此水溶液含有挥发性比水更大的液体。

适合的挥发性液体包括乙醇(优选的挥发性液体)(沸点78.3℃)，甲醇(b.p.64.5℃)，和丙酮(b.p.56℃)。挥发性液体被用作成壳物质的溶剂，而且在所用比例下，能与水混溶。

挥发性液体在水溶液中的比例随挥发性化合物的性质，成壳材料的浓度和性质，喷入溶液时的温度和压力，以及微胶囊产品的需要而变化。溶液中挥发性液体一般在0.1-80％v/v之间，优选1-50％v/v，最优选5-30％v/v，例如20％v/v。也可用挥发性液体的混合物，在这种情况下，这些百分比则指的是挥发性液体的总含量。

喷雾干燥可一步进行，直接提供所需的微胶囊产品。另外，也可将直接得到的产品经过另外的步骤，如加热，使之进一步交联，并且降低微胶囊蛋白外壳的溶解性。即构成两步法。

对于一种将用于注射到人体血液中的产品，例如在超声波诊断方法中作为具有回波特性的造影剂(此产品的一个预定用途)，全过程最好在无菌条件下进行。因此，蛋白溶液为无菌且为非热解性，加热室中的气体首先通过一个0.2μm的滤器，喷雾干燥器最初经高压灭菌等。另外，最终的产品也应进行无菌处理，例如使之经致电离辐射杀菌。

成壳物质是水溶性的，优选蛋白质(此术语用于包括非天然存在的多肽和多氨酸)。例如：胶原蛋白，明胶或(血清)白蛋白，在每一情况中(如果微胶囊是用于人体的)最好选用来源于人体的蛋白(即由人体中得到的或与体蛋白结构相当的)，以及聚赖氨酸或聚谷氨酸。蛋白质也可以是由损赠血液中得到的，或经微生物发酵(包括细胞系列)得到的人血清白蛋白(HA)，后者已经被转化而表达HA。另外，也可以使用简单或复杂的糖类，简单的氨基酸或脂肪酸，例如赖氨酸，甘露糖醇，葡聚糖，正十六烷酸或二十二碳烷酸。

表达HA(此术语包括人白蛋白的类似物和碎片，例如EP-A-322094中的蛋白，以及单体白蛋白的聚合物)的技术已经在EP-A-201239和EP-A-286424中公开。它们均在此引入，作为参考。HA的“类似物和碎片”包括如下全部多肽：(ⅰ)在本发明的方法中能形成微胶囊的多肽，(ⅱ)其中该氨基酸序列的至少50％(优选至少75％,80％,90％或95％)的连续区域，至少有80％(优选至少90％,95％或99％)相应于性质相同的人体白蛋白的至少50％(优选75％,80％,90％或95％)的连续区域。也可以用DNA重组技术制得的HA。因此，该HA可由现有技术中已知的方法，通过表达酵母或其他微生物中的HA-编码核甙酸系列，并且纯化产品而制备。此材料不含与血清衍生物有关的脂肪酸，最好基本上不含脂肪酸；即血清衍生物的脂肪酸水平含量不超过1％。优选在HA中，不能检测出脂肪酸。

水溶液或分散液中，尤其在材料为白蛋白时，蛋白含量优选0.1-50％w/v最好选用1.0-25.0％或5.0-30.0％。大约5-15％是最佳的。也可用成壳材料的混合物，上述百分比则指成壳材料的总含量。

待喷雾的制剂中可含有除成壳物质，水和挥发性液体以外的物质。因此，水相可含重量比为1-20％的糖类和聚合物等水溶性亲水化合物作为稳定剂，例如：聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚乙二醇(PEG)，明胶，聚谷氨酸，和聚糖类，如淀粉，葡聚糖，琼脂，黄原胶等。