[发明专利]形成粘蛋白糖链的肽序列和修饰蛋白质使与粘蛋白糖链相连的方法

权利要求书

1、含有由式(I)：X(-1)-X(O)-X(1)-X(2)-X(3)(I)代表的序列的一种蛋白质或肽，其中X(-1)和X(2)独立地代表任何氨基酸，X(O)代表苏氨酸(T)或丝氨酸(S)，X(1)和(3)独立地代表任何氨基酸，其前提是X(1)和X(3)中至少有一个代表脯氨酸(P)。

2、根据权利要求1的蛋白质或肽，其中X(1)或(3)代表P或A且其中至少一个代表P。

3、根据权利要求1或2的蛋白质或肽，其中X(1)代表P。

4、根据权利要求1或2的蛋白质或肽，其中X(3)代表P。

5、根据权利要求1或2的蛋白质或肽，其中X(1)或(3)代表P。

6、根据权利要求1至5中任意一项的蛋白质或肽其中X(-1)代表Y，A，W，S，G，V，F，T或I，X(2)代表A，P，C，K，R，H，S，M，T，Q，V，I，L或E。

7、根据权利要求1至6中任意一项的蛋白质或肽其中X(0)代表T。

8、根据权利要求1至7中任意一项的蛋白质或肽序列，其中X(-1)的N端一侧另外存在一个或2个氨基酸，该氨基酸可以是A，P，G，E，Q，T，R或D。

9、根据权利要求1的肽，它选自如下序列：

ATPAP

AATPAP

AAATPAA

AAATAAP

PAATAAP

APATAAP

AAPTAAP

AAATAPP

PAATPAP

APATPAP

AAXaTPXbP

其中Xa和Xb代表任何氨基酸，但Xa或Xb中有一个代表A，以及；AAATPAPXc其中Xc代表任何氨基酸。

10、根据权利要求1的蛋白质或肽，其中蛋白质或肽包含根据权利要求9的任一序列。

11、根据权利要求1至10中任意一项的蛋白质或肽在制备作为UDP-GalNAc：多肽α1，O-GalNAc转移酶(O-GalNAc T)的底物的蛋白质或肽及包含导入其中的GalNAc的应用。

12、一种将粘蛋白型糖链导入蛋白质或肽的方法，包含下列步骤：

提供根据权利要求1至10中任意一项的蛋白质或肽；以及

将作为底物的该蛋白质或肽与粘蛋白型糖链反应，从而将粘蛋白型糖导入蛋白质中。

13、将GalNAc导入蛋白质或肽的方法，包含下列步骤：

提供根据权利要求1至10中任意一项的蛋白质或肽；以及

在UDP-GalNAc：多肽α1，O-GalNAc转移酶(O-GalNAc T)存在的条件下将作为底物的该蛋白质或肽与UDP-GalNAc(其中UDP代表尿核苷5′-二磷酸，GalNAc代表N-乙酰半乳糖胺)反应。

14、根据权利要求12或13的方法，其中根据权利要求1至10中任意一项的蛋白质或肽是经DNA重组或化学合成制备。

15、由根据权利要求12至14中任意一项的方法获得的结合粘蛋白型糖链的蛋白质或肽。

16、制备结合粘蛋白型糖链的蛋白质或肽的方法，包含下列步骤：

用编码根据权利要求1至10中任意一项的蛋白质或肽的DNA转化真核细胞；以及

在转化的细胞中表达蛋白质或肽并从该种细胞中分泌蛋白质或肽。

17、将粘蛋白型糖链导入感兴趣的蛋白质或肽之位置的方法，包含下列步骤：

将编码由权利要求1限定的式(I)代表的序列的DNA插入或添加到在编码感兴趣的蛋白质或肽的DNA中并且是与试图导入粘蛋白型糖链的位点相对应的位置中，或用编码权利要求1限定的由式(I)代表的序列的DNA取代包括该位置的部分DNA片段，从而获得含有编码式(I)代表的序列的DNA的编码蛋白质或肽的DNA；    

用上面步骤获得的DNA转化真核细胞；以及

在该种转化的细胞中表达蛋白质或肽并从该种细胞中分泌结合粘蛋白型糖链的蛋白质或肽。

18、根据权利要求16或17的方法，其中真核细胞是动物细胞。