[发明专利]在转基因动物中生产纤维蛋白原

权利要求书

1.一种生产纤维蛋白原的方法，包括：

提供编码与纤维蛋白原Aα链相连接的分泌信号的第一条DNA片段，编码与纤维蛋白原Bβ链相连接的分泌信号的第二条DNA片段，和编码与纤维蛋白原γ链相连接的分泌信号的第三条DNA片段，其中第一、第二、第三条片段中的每一条都与在雌性哺乳动物宿主的乳腺中表达其所需要的附加的DNA片段相连接，且第一条DNA片段包含编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的人纤维蛋白原Aα链的核苷酸序列，第二条DNA片段包含编码具有SEQ IDNO：4所示氨基酸序列的人纤维蛋白原Bβ链的核苷酸序列，第三条DNA片段包含具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的人纤维蛋白原γ链的核苷酸序列；

将所说的DNA片段导入一个非人类哺乳动物物种的受精卵；

将所说的受精卵植入所说的物种的雌性动物的输卵管或子宫内，以获得带有所说的DNA结构的后代；

繁殖所说的后代以产生雌性后裔，来表达所说的第一、第二、第三条DNA片段并生产出含有由这些片段编码的生物感受态的纤维蛋白原的乳汁；

从所说的雌性后裔中收集乳汁；

从这些乳汁中回收纤维蛋白原。

2.根据权利要求1的方法，其中所说的物种选自由绵羊，猪，山羊和牛组成的一组。

3.根据权利要求1的方法，其中所说的第一，第二和第三条DNA片段中的每一条包括一个内含子。

4.根据权利要求1的方法，其中所说的第一，第二和第三条DNA片段的摩尔比在范围0.5-1∶0.5-1∶0.5-1范围之内。

5.根据权利要求1的方法，其中所说的第一，第二和第三条DNA片段中的每一条都连接有选自酪蛋白，β-乳球蛋白，α-乳清蛋白以及乳清酸性蛋白基因启动子组成的一组中的一个转录启动子。

6.根据权利要求1的方法，其中所说的第一，第二和第三条DNA片段在β-乳球蛋白启动子的控制之下表达。

7.根据权利要求1的方法，其中所说的导入步骤包括向所说的受精卵的一个原核中注射所说的第一，第二和第三条DNA片段。

8.根据权利要求1的方法，其中所说的纤维蛋白原是人类纤维蛋白原。

9.根据权利要求1的方法，其中所说的第二条DNA片段包括如SEQ ID NO：3所示的从470位-8100位核苷酸的核苷酸序列。

10.根据权利要求1的方法，其中所说的第二条DNA片段包括如SEQ ID NO：3所示的从512位-8100位核苷酸的核苷酸序列。

11.一种生产纤维蛋白原的方法，包括：

将编码与纤维蛋白原Aα链相连的分泌信号的第一条DNA片段掺入β-乳球蛋白基因，生产出第一个融合基因，其中第一条DNA片段包含编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的人纤维蛋白原Aα链的核苷酸序列；

将编码与纤维蛋白原Bβ链相连的分泌信号的第二条DNA片段掺入β-乳球蛋白基因，生产出第二个融合基因，其中第二条DNA片段包含编码具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的人纤维蛋白原Bβ链的核苷酸序列；

将编码与纤维蛋白原γ链相连的分泌信号的第三条DNA片段掺入β-乳球蛋白基因，生产出第三个融合基因，其中第三条DNA片段包含编码具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的人纤维蛋白原γ链的核苷酸序列；

将所说的第一、第二、第三个融合基因导入一非人类哺乳动物的种系，使得所说的DNA片段在该哺乳动物或其雌性后裔的乳腺中表达，并且生物感受态的纤维蛋白原分泌到该哺乳动物或其雌性后裔中的乳汁中；

从所说的哺乳动物或其雌性后裔中获得乳汁；

从所说的乳汁中回收所说的纤维蛋白原。

12.根据权利要求11的方法，其中所说的哺乳动物是绵羊，猪，山羊或牛。

13.根据权利要求11的方法，其中所说的第一，第二和第三个融合基因中的每一个包括一个内含子。

14.根据权利要求11的方法，其中所说的第一，第二和第三个融合基因的摩尔比在0.5-1∶0.5-1∶0.5-1范围之内。