[发明专利]抗体纯化

权利要求书

1.一种从包含相同物质的混合物中纯化单体IgG抗体的方法，包括将所述混合物与疏水相互作用层析支持物接触并从支持物上选择性地洗脱所述单体。

2.根据权利要求1的方法，其中IgG选自抗RSHZ-19和CH-CD4。

3.根据权利要求1的方法，其中HIC支持物选自烷基C₂-C₈琼脂糖、芳基琼脂糖、烷基硅胶、芳基-硅胶烷基有机聚合物树脂和芳基有机聚合物树脂。

4.根据权利要求3的方法，其中支持物选自丁基-、苯基-和辛基-琼脂糖和丁基-、苯基和醚-有机聚合物树脂。

5.根据权利要求4的方法，其中支持物为苯基-有机聚合物树脂。

6.根据权利要求4的方法，其中支持物为丁基-有机聚合物树脂。

7.根据权利要求1的方法，其中抗体用低盐缓冲液选择性地洗脱。

8.根据权利要求7的方法，其中抗体用盐减至50mM磷酸盐，pH7.0的梯度选择性地洗脱。

9.一种从包含相同物质的条件细胞培养基中纯化IgG抗体的方法，包括顺次将培养基经(a)蛋白A亲合层析，(b)离子交换层析和(c)疏水相互作用层析处理。

10.根据权利要求9的方法，其中离子交换层析使用的支持物选自CM-23-、CM-32-、CM-52-纤维素；CM-和，SP-交联葡聚糖，CM-和S-琼脂糖；CM-有机聚合物树脂；DEAE-QAE-Q-交联葡聚糖；DEAE-、QAE-、Q-联琼脂糖；及DEAE有机聚合物树脂并使用一种缓冲的盐溶液。

11.根据权利要求10的方法，其中支持物为CM-agarose FastFlow，盐为NaCl。

12.根据权利要求10的方法，其中缓冲的盐溶液为含100mMNaCl的pH6.0的40mM柠檬酸盐。

13.根据权利要求9的方法，其中疏水相互作用层析采用的支持物选自烷基C₂-C₈-琼脂糖，芳基-琼脂糖，烷基-硅胶，芳基-硅胶，烷基-有机聚合物树脂和芳基-有机聚合物树脂。

14.根据权利要求13的方法，其中支持物选自丁基-、苯基-和辛基-琼脂糖及丁基-、苯基-和醚-有机聚合物树脂。

15.根据权利要求14的方法，其中支持物为苯基-有机聚合物树脂或丁基-有机聚合物树脂。

16.根据权利要求9的方法，其中支持物为苯基-或丁基-有机聚合物树脂，并且抗体用低盐缓冲液选择性地洗脱。

17.根据权利要求16的方法，其中抗体用减少至50mM的磷酸钠缓冲液pH7.0的梯度选择性地洗脱。

18.根据权利要求9的方法，其中蛋白A层析采用蛋白A联到可控多孔玻璃的支持物，用低pH洗脱液洗脱。

19.根据权利要求18的方法，其中所述缓冲液为25mM柠檬酸盐，pH3.5。

20.一种从条件细胞培养基纯化抗体的方法，包括：

(a)将抗体吸附到蛋白A层析支持物上；

(b)用至少一种缓冲液冲洗吸附的抗体；

(c)洗脱来自步骤(b)的抗体；

(d)将来自步骤(c)的抗体吸附到离子交换层析支持物上；

(e)用至少一种缓冲液冲洗吸附的抗体；

(f)选择性地洗脱来自步骤(e)的抗体；

(g)将步骤(f)的洗脱液吸附到疏水相互作用层析支持物上；

(h)用至少一种缓冲液冲洗吸附的抗体；

(i)洗脱吸附的抗体；及

(j)回收抗体。

21.根据权利要求20的方法，它包括一步或多步任选的灭活病毒步骤，如果病毒存在的话。

22.根据权利要求21的方法，其中病毒灭活步骤在步骤(f)后和步骤(g)前完成。

23.根据权利要求22的方法，其中所述病毒灭活步骤包括用盐酸胍处理洗脱液一段充足的时间，使病毒失活，再加入硫酸铵溶液。