[发明专利]抗体纯化

说明书

发明领域：

本发明涉及蛋白质纯化领域。更具体地，本发明涉及将疏水相互作用层析(HIC)用于分离免疫球蛋白G单体，以及在一种联合层析方法中联用HIC以进行IgG抗体分子的纯化。

发明背景：

历史上，蛋白纯化方案基于待纯化的蛋白质与不期望的蛋白污染物之间分子的大小，电荷和溶解度性质的差异。基于这些参数的方法包括分子排阻层析、离子交换层析和差速沉淀等。

分子排阻层析，或被称为凝胶过滤或凝胶渗透层析，基于流动相中大分子穿入固定相颗粒的孔中。差速穿入是颗粒流体体积的作用。因此，在理想条件下，较大的分子从颗粒内部逐出而较小的分子可进入此体积，洗脱顺序可通过蛋白大小预测，因为在洗脱体积和分子量对数之间存在线性关系。

层析支持物基于交联葡聚糖如SEPHADEX^，球形琼脂糖珠和SEPHAROSE^(可从瑞典的Pharmacia AB.Uppsala购得)，基于交联的聚丙烯酰胺如BIO-GEL(从BioRad Laboratories，Richmond，Caiifornia购得)或基于乙烯二醇-异丁烯酸共聚物如TOYOPEARLHW65(从Toso Haas Co.，Tokyo，Japan商品购得)在本发明某些方面的实施中，用于形成分子排阻或HIC层析的各种层析柱。

沉淀法基于这样一个事实，即蛋白质粗混合物中，蛋白质各自的溶解度常常有较大不同。虽然在水溶性介质中，蛋白质的溶解度依赖于多种因素，但是就这种讨论而言，一般说来，如果一种蛋白质与溶剂的相互作用比与它相同或相似的蛋白质分子的相互作用强，则该蛋白质是可溶的。未想与描述沉淀现象的特殊作用机制理论结合，然而相信蛋白质与水分子之间的相互作用可通过氢键产生，借助于几种不带电基团和/或静电的，如偶极子，带电基团及沉淀剂如单价阳离子盐(如硫酸铵)与蛋白质竞争水分子。因而在高盐浓度下，蛋白质被“脱水”减小了与水环境的相互作用，增加了与相似蛋白质的聚集作用，导致从介质中沉淀。

离子交换层析涉及样品中带电的功能基团与吸附剂表面相反电荷的离子功能基团的相互作用。已知两种普遍的相互作用。阴离子交换层析通过带负电的氨基酸侧链(如天冬氨酸和谷氨酸)与带正电的表面相互作用介导，阳离子交换层析以带正电的氨基酸残基(如赖氨酸和精氨酸)与带负电的表面相互作用介导。

最近已发展亲合层析和疏水相互作用层析技术以补充较传统的大小排阻和离子交换层析方法。亲合层析依赖于蛋白质与一种固定化配基的特异性相互作用，该配基对感兴趣的具体的蛋白是专一的，该配基可以是底物、底物类似物、抑制剂、受体或抗体。或者该配基能与一些相关蛋白反应。可使用基团特异配基如磷酸腺苷、二磷酸腺苷、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或某些染料来回收一特定种类的蛋白质。

考虑到抗体分子的纯化，可应用特异的或广泛的亲合技术。抗体亲合纯化的最专一配基选择是与目的抗体反应的抗原(或其抗原决定簇)。许多已知的免疫吸附剂试验如酶联免疫吸附试验(ELISA)便基于这种特异的抗原/抗体亲合反应。

然而，广泛的亲合技术也有用。例如已知葡萄球菌蛋白A结合IgG类别的某些抗体(见：Ey，P.L.et al.Immunochemistry 15：429-36(1978))或者可用异源种类抗血清(如兔抗鼠抗血清)分离(见CurrentProtocols in Molecular Biology Supra，Chap 11)。