[发明专利]测定被分析物

说明书

本发明涉及改善的、在固体底物上测定被分析物的方法。尤其，本发明方法适用于体液样品，如唾液、血清、全血和尿样。

通过免疫测定法测定各种体液中的物质的方法是公知的并且经常用于各种不同的目的。实例包括测定血、唾液、尿或其它体液样品中的抗体以此作为病原体存在的指征，并由此诊断各种疾病。其它体液测定包括妊娠试验和为确定血中乙醇量的检验。

尽管可通过测定大量液体来进行这些检验，但通过将样品点在固定有用于被分析物的特异性结合试剂的固体底物上，然后测定特异性结合复合物的含量来进行上述检验通常更容易、更方便。这些检验是很普及的，因为它们相对干净并且操作简单。

然而，在固体底物上进行检验有某些不利之处。首先，在固体底物上进行的很多测定中，有不尽人意数量的假阳性结果，即使样品中没有被分析物，假阳性结果也显示含有被分析物。

第二个问题与使用多孔固体底物有关。理论上，这种底物是特别适用的，因为它能使大量样品从底物表面除掉，同时被分析物由于与固定在底物上的特异性结合分子结合而保留在其表面上。然而实际上有许多困难，因为样品通过底物的流动一般是很慢的，使得有时测定要花费20-30分钟的时间。这对于要求很快知道结果的检验尤其不利，例如，在会诊期间，可由普通医生通过其它方法进行检验的情形中。

上面讨论的不利因素归因于在很多样品中存在不需要的颗粒物质，包括细胞碎片，大的蛋白质，粘多糖和其它大分子。已尝试，通过在试图测定特异性结合复合物之前过滤样品来克服由样品中这些不需要物质产生的问题。

然而，令人意外的是，这样做并非特别有效，并且仍然可得到不尽人意数量的假阳性结果，样品通过底物流动的时间仍然很长，甚至在将样品加入底物之前过滤两次样品也是这样。因此似乎粘蛋白和颗粒物质的存在并非引起假阳性结果和样品流动时间长的全部原因。

然而，为解决假阳性结果和样品流动慢的问题而进行了很多尝试后，本发明人发现，当这种测定涉及在被分析物和固定在多孔固体底物上的特异性结合分子之间的特异性结合复合物的测定时，通过在将样品加到底物上之后擦拭底物表面，可简便而明显地改善检验的可靠性。这是绝对没有料到的，因为曾经认为，通过前面曾尝试过的过滤步骤已除掉了所有的污染物，然而，现在看来似乎并非如此。

因此，本发明提供了一种用于测定体液样品中被分析物的存在的方法，该方法包括使样品与能够与被分析物形成特异性结合复合物的特异性结合试剂相接触，其中，特异性结合试剂被固定在多孔固体底物上；并测定特异结合复合物的含量；其特点是，在测定特异性结合复合物之前，擦拭底物表面以便除掉未吸附的污染物。

在试图测定特异性结合复合物之前擦拭底物这一简单步骤对于测定的成功具有显著的作用。样品从底物上流动所花费的时间，从20-30分钟减小到1-2分钟并且几乎完全消除了假阳性结果，同时仍保留测定对真正阳性结果的灵敏性。

可通过手工的方法进行擦拭，或者，该过程也可以是自动化的。通常，使用能吸收的物质来擦拭底物，适宜物质的实例包括棉花、棉绒和能吸收的纸。

擦拭步骤应充分进行，以便从底物表面除掉未与特异性结合分子结合的任何物质。为了让医生清楚所有不需要的物质都已除掉，可将着色剂加入样品中。如果在将样品转称到底物之前，将缓冲剂或表面活性剂溶液加到样品中，那么可将着色剂包含在缓冲剂或表面活性剂溶液中，但并非必需这样。

着色剂可以是象染料这样的试剂，它对于粘蛋白、细胞碎片组分或保留在底物上、体液测定时引起很多假阳性问题的其它污染物是特异性的。然而，提供一种已染色的颗粒物质如胶乳、琼脂糖、聚苯乙烯或者不与污染物结合并由于颗粒太大不能通过多孔底物而简单地留在底物表面上的其它聚合物作为着色剂，这通常是更简单的。当然，颗粒应大于底物的孔径，但也必须小于可使用的任何预滤器的孔径。已发现，在很多情况下，使用直径大约为3μm的颗粒是适宜的，因为正如下文中要更详细地讨论的那样，在任何最初的纯化步骤中，可选择孔径大于该值的滤器。染色颗粒与粘蛋白、当较小的颗粒通过底物时可能引起假阳性问题的颗粒杂质一起留在底物表面。

因此，当使用着色剂时，对于医生来说，从底物表面擦净着色剂并因此确信所有的表面碎片都已从底物上除掉是件简单的事情。

样品可包含任何体液，例如，唾液、全血、血清或尿，但对于唾液和全血而言，改善最大。因为总的看来，它们可能含有较大量的细胞碎片、高分子量的蛋白质、粘多糖和其它不能通过多孔底物孔隙的高分子量物质。