[发明专利]生产核酸的拷贝

权利要求书

1.一种生成至少是部分存在或潜在存在于样品中的核酸链(靶链)拷贝的方法，该方法包括以下步骤：(i)提供一种固相支持系统，其上固定有大量的能同靶链杂交的单链寡核苷酸。(ii)提供了靶链的单链形式并将其同支持物上的寡核苷酸杂交，寡核苷酸的数量要大大超出靶链的数量，(ii)(a)清洗支持系统以除去未杂交的物质，(iii)生成靶1链的拷贝，该拷贝掺入有固定的寡核苷酸及包含同至少是部分靶链互补的核苷酸序列，也就是说生成的靶1链拷贝至少有一部分是以靶链为模板而生成的，并且，如果需要，可完成靶1链拷贝序列形成。(iv)变性同靶1链拷贝杂交的核酸链并且可选择使至少是部分的前述链同支持物上的未转变成靶1链拷贝的寡核苷酸再杂交。(v)同时，(a)用固定于固相支持物上的靶1链拷贝为模板来合成(从杂交于靶1链拷贝的引物上合成)靶2链拷贝，靶2链拷贝含有感兴趣的核酸序列，且(b)若靶链已同固定的寡核苷酸杂交，则可用其作为模板来合成更多的至少是部分的靶1链拷贝，并且(若需要)完成靶1链的形成，并且(vi)按所需次数重复步骤(iv)和(v)，每次重复步骤(iv)和(v)均用靶2链拷贝来生成更多的靶1链拷贝。

2.权利要求1的方法，其中的固相支持系统是一种颗粒系统，寡核苷酸被固定于颗粒上，

3.生成至少是部分核酸链(靶链)的拷贝的方法，靶链存在或潜在存在于样品中，本方法包括步骤(i)提供一种颗粒固相支持系统，其上固定有大量的能同靶链杂交的单链寡核苷酸，(ii)提供了靶链的单链形式并且使靶链同固定于支持物上的寡核苷酸杂交，寡核苷酸的数量要大大超过靶链的数量，(iii)生成靶1链拷贝，该拷贝包括固定的寡核苷酸及同至少是部分靶链互补的核酸序列，即生成的靶1链拷贝至少有一部分是以靶链为模板而合成的，并且，如果需要，可完成靶1链拷贝序列的形成，(iv)变性同靶1链拷贝杂交的核酸链并且可选择使至少部分的前述的链同支持物上的尚未转变成靶1链拷贝的寡核苷酸再杂交，(v)同时，(a)用固定于固相支持物上的靶1链拷贝为模板来生成(从杂交于靶1链拷贝的引物上合成)靶2链拷贝，靶2链拷贝含有感兴趣的核酸序列，且(b)若靶链已同固定的寡核苷酸杂交，则可用其作为模板来进一步合成更多的至少是部分的靶1链拷贝，并且(若需要)完成靶1链拷贝的形成，并且(vi)按所需次数重复步骤(iv)和(v)，每次重复步骤(iv)和(v)均用靶2链拷贝来生成更多的靶1链拷贝。

4.权利要求3的方法，其中在步骤(ii)后，在执行步骤(iii)前清洗支持系统以移去未杂交的物质。

5.权利要求2到4的任一项的方法，其中颗粒是非多孔性二氧化硅

6.权利要求2到5任一项的方法，其中颗粒的大小在50到200微米。

7.权利要求2到6任一项的方法，其中寡核苷酸是通过硅氧烷基质固定于支持物上的。

8.权利要求2到7的任一项的方法，其中颗粒是在柱子中，液体可方便地加入或移出柱子。

9.权利要求1到8的任一项的方法，其中所有的或基本上所有的固定于支持物上的原始寡核苷酸都转变成靶1链拷贝。

10.权利要求1到9的任一项的方法，其中支持物上的寡核苷酸的方向使得它们可以用靶链作为模板进行延伸或者是用杂交于其上的靶2链拷贝作为模板进行延伸，以产生靶1链拷贝。

11.权利要求2的方法，其中固相支持系统上包含两种不同的固定的寡核苷酸，其方向如权利要求10中所述，一种的方向是使其能同双链核酸的一条链杂交，另一种的方向是使其同双链核酸的另一条链杂交。

12.权利要求1到9的任一项的方法，其中靶1链拷贝是这样产生的，使引物同已经与固定的寡核苷酸杂交的靶拷贝或靶2链拷贝杂交，然后在步骤(v)(b)中向着寡核苷酸方向延伸引物，最后通过与寡核苷酸的连接来完成靶1链拷贝的制备。

13.权利要求11的方法，其中固相支持物上包含两种不同的固定的寡核苷酸，其方向和权利要求12中所述，一种的方向是使其能同双链核酸的一条链杂交，另一种的方向是使其能同核酸的另一条链杂交。