[发明专利]用DEAE-5PW阴离子-离子交换色谱和疏水作用色谱纯化硫代磷酸寡脱氧核苷酸无效
申请号: | 95194675.7 | 申请日: | 1995-06-30 |
公开(公告)号: | CN1155887A | 公开(公告)日: | 1997-07-30 |
发明(设计)人: | 帕特里夏·庞马;丹·达菲;保罗·达维德齐克 | 申请(专利权)人: | 海布里顿公司 |
主分类号: | C07H1/06 | 分类号: | C07H1/06 |
代理公司: | 柳沈知识产权律师事务所 | 代理人: | 黄益芬 |
地址: | 美国马*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | deae pw 阴离子 离子交换 色谱 疏水 作用 纯化 硫代磷酸 脱氧 核苷酸 | ||
1、一种纯化无DMT保护的硫代磷酸寡核苷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括将该寡核苷酸混合物装到含有DEAE-5 PW阴离子交换色谱树脂的柱子上,并用含盐的洗脱缓冲液洗脱。
2、权利要求1的方法,其中寡核苷酸长度是10至大约35个核苷酸。
3、权利要求2的方法,其中的盐是氯化钠,其含量范围为大约0至大约2M,pH在大约7.0和大约10.5之间。
4、权利要求3的方法,其中氯化钠浓度是大约0.85M至大约2M。
5、权利要求3的方法,其中硫代磷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的长度为大约20-35个寡核苷酸。
6、权利要求5的方法,其中洗脱液pH是大约7.2。
7、权利要求3的方法,进一步包括通过切向流过滤将DEAE-5 PW洗脱液脱盐。
8、权利要求1的方法,其中寡核苷酸的装柱规格为大约150 O.D.单位/ml的装载浓度。
9、一种纯化无DMT保护的硫代磷酸寡核苷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括将寡核苷酸混合物装到含疏水作用色谱树脂的柱子上并用盐洗脱。
10、权利要求9的方法,其中疏水作用色谱树脂是苯基-琼脂糖凝胶快流色谱树脂或苯基-5 PW色谱树脂。
11、权利要求10的方法,其中寡核苷酸长度是10至大约35个核苷酸。
12、权利要求1酸的方法,其中盐是的氯化钠,其浓度范围为大约1.0至大约3M,pH在大约7.2和8.5之间。
13、权利要求12的方法,其中氯化钠浓度是大约3M。
14、权利要求12的方法,其中硫代磷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的长度为大约20-35个寡核苷酸。
15、权利要求12的方法,其中洗脱缓冲液pH是大约7.5。
16、权利要求9的方法,进一步包括通过切向流过滤将洗脱液脱盐。
17、一种纯化DMT保护硫代磷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括疏水作用色谱。
18、权利要求17的方法,其中疏水作用色谱包括使用苯基琼脂糖凝胶或TSK苯基-5PW树脂的柱色谱
19、权利要求17的方法、其中寡核苷酸长度
20、权利要求18的方法,其中盐是乙酸铵,其浓度为大约0.75M
21、一种纯化DMT保护的硫代磷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括用权利要求19的方法从寡核苷酸溶液中去除过量的氢氧化铵。
22、一种纯化DMT保护的硫代磷酸寡核苷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括用权利要求19的方法从无DMT保护的寡核苷酸中分离DMT保护的寡核苷酸。
23、一种纯化DMT保护的硫代磷酸寡核苷酸和二硫代磷酸寡核苷酸的方法,包括用权利要求19的方法从寡核苷酸溶液中去除过量的氢氧化铵,以及从无DMT保护的寡核苷酸中分离DMT保护的寡核苷酸。
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