[发明专利]虫荧光素酶标记方法和标记的产物

权利要求书

1.一种将虫荧光素酶与抗体或核酸结合的方法，它包括(a)将虫荧光素酶与一种或多种D-虫荧光素，镁离子和腺苷三磷酸混合和(b)用共价偶联试剂进行虫荧光素酶和抗体或核酸之间的共价偶联反应；前提是D-虫荧光素，镁离子和腺苷三磷酸都存在时，必须将反应中的氧去除。

2.权利要求1的方法，其中步骤(a)的操作是在溶液中将虫荧光素酶与D-虫荧光素，镁离子和/或腺苷三磷酸混合。

3.权利要求1的方法，其中镁离子和腺苷三磷酸二者是以腺苷三磷酸镁的形式存在。

4.权利要求1的方法，其中步骤(a)操作中为4μmol/L虫荧光素酶应用了0.2mmol/L或更多的腺苷三磷酸。

5.权利要求4的方法，其中步骤(a)的操作需要2mmol/L镁离子的存在。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中共价偶联剂包括戊二醛，琥珀酰胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯和/或琥珀酰胺基-4-(对-马来酰亚胺苯基)丁酸酯。

7.权利要求1-5任一项的方法，其中步骤(b)的操作是在虫荧光素酶已与D-虫荧光素，镁离子和/或腺苷三磷酸混合后用共价偶联试剂进行的。

8.权利要求7的方法，其中应用了0.5mmol/L腺苷三磷酸。

9.一种与活性虫荧光素酶结合的标记抗体或核酸，它由权利要求1-8任一项的方法提供。

10.一种特异的结合测试法，其特征在于它包括对权利要求9的标记抗体或核酸的应用。

11.权利要求10的特异结合测试法，其中靶化学本体的存在和/或量是通过将其特异地与权利要求9的标记抗体或核酸结合，在一定的条件下将结合的本体与D-虫荧光素接触而确定的，其中的条件是虫荧光素酶可裂解D-虫荧光素并引起发光，并且发射的光的量与靶化学本体的存在相关。

12.权利要求11的特异结合测试法，其中靶化学本体是一种抗原并且在同与权利要求9的活性虫荧光素酶结合的标记抗体结合之前被一种对其特定的捕获抗体捕获。

13.权利要求12的特定的结合测定，其中捕获抗体与可将光传向光测量装置的光导向装置结合。

14.权利要求13的特异结合测试法，其中光导向装置是光导纤维。

15.权利要求13或14的特异结合测试法，其中一个光探测装置被用于同时监测一维或二维探测器陈列表面几个不同的区域，每个区域具有固定化的分别对不同的抗原或抗体特异的抗体或抗原；从而可通过对所探测光发射的位置的检测而检测特定的抗原的存在。

16.权利要求15的特异结合测试法，其中的光探测器装置是电荷耦联器件。

17.权利要求9的与活性虫荧光素酶结合的标记抗体或核酸，其特征在于结合的虫荧光素酶具有用于制备标记抗体的虫荧光素酶活性的10％或更多的活性。

18.权利要求1的方法，该方法包括(a)将虫荧光素酶与D-虫荧光素或镁离子和腺苷三磷酸的结合物相混合，以使镁离子和腺苷三磷酸的浓度分别大于0.2mmol/L和0.05mmol/L和(b)用共价偶联试剂在虫荧光素酶和抗体或核酸之间进行共价偶联反应。

19.权利要求1的方法，该方法包括(a)在氧不存在的情况下，将虫荧光素酶与D-虫荧光素，镁离子和腺苷三磷酸混合，以使镁离子和腺苷三磷酸的浓度分别大于0.2mmol/L和0.05mmol/L和(b)用共价偶联试剂进行虫荧光素酶和抗体或核酸之间的共价偶联反应。