[发明专利]三肽基氨肽酶

权利要求书

1.一种提取的真菌三肽基氨肽酶。

2.一种三肽基氨肽酶(TPAP)，它由一种DNA结构编码，该结构包括i)序列1、2或3中示出的DNA序列，或ii)DSM 9570的部分TPAP编码DNA序列，或iii)一个核苷酸序列，它能够与以序列1、2或3中示出的DNA序列为基础制备的探针或以序列4-14中任一个所示出的氨基酸序列为基础制备的探针杂交，而且它编码一种TPAP。

3.一种提取的TPAP，它能够裂解底物Phe-Pro-Ala-pNA，该底物能与纯化的黑曲霉(A.niger)TPAP或纯化的米曲霉(A.oryzae)TPAP发生免疫交叉反应，和/或包括以下N-末端序列

Ala-Xaa(1)-Asn-Xaa(2)-Ser-His-Cys-Asp-Ser-Ile-Ile-Thr-Pro-Xaa(3)-Cys-Leu-Lys-Xaa(4)-Leu-Tyr-Asn-Ile-Gly-Asp-Tyr-Gln-Ala-Asp-Xaa(5)-Xaa(6)(序列15)，其中，Xaa(1)、Xaa(2)、Xaa(3)、Xaa(4)、Xaa(5)和Xaa(6)中的任一个可以相同或不同，而且可以选自任何天然氨基酸残基。

4.如权利要求3的TPAP，其中Xaa(1)为Lys或Gln，Xaa(2)为Ile或Thr，Xaa(3)为Pro或His，Xaa(4)为Glu或Gln，Xaa(5)为Pro或Ala和/或Xaa(6)为Lys或Asn。

5.如权利要求1-4中任一项的TPAP，其最佳pH范围为5.0-7.5。

6.如权利要求1-5中任一项的TPAP，它包括序列4-9中示出的部分氨基酸序列中的至少一种，和/或最佳pH范围大约为5.0～5.5。

7.如权利要求1-5中任一项的TPAP，它包括序列10-14中示出的部分氨基酸序列中的至少一种，和/或最佳pH范围大约为5.5～7.5。

8.如权利要求2-7中任一项的三肽基氨肽酶，它来源于微生物。

9.如权利要求8的三肽基氨肽酶，它来源于真菌。

10.如权利要求9的三肽基氨肽酶，它可以获自曲霉属(Aspergillus)的一个菌株，特别是获自米曲霉、黑曲霉、日本曲霉(A.japonicus)或臭曲霉(A.foetidus)。

11.一种DNA结构，包括一个编码一种来源于真菌的TPAP的DNA序列。

12.一种编码一种TPAP的DNA结构，它包括

i)序列1、2和3中示出的DNA序列中的至少一个，或

ii)DSM 9570的与TPAP相关的DNA序列，或

iii)一个核甘酸序列，它能够与以序列1、2或3中示出的DNA序列为基础制备的寡核苷酸探针或以序列4-14中任一个所示出的氨基酸序列为基础制备的寡核苷酸探针杂交，而且它能编码一种TPAP，或

iv)一个互补于i)、ii)或iii)的DNA序列的DNA序列。

13.一种表达载体，它包括权利要求11或12所述的DNA结构。

14.一种宿主细胞，它包括权利要求11或12所述的DNA结构，或包括权利要求13的表达载体。

15.一种生产TPAP的方法，包括在适于TPAP表达的条件下培养权利要求14的宿主细胞，以及从培养物中回收TPAP。

16.一种降低或消除TPAP生产细胞的TPAP生产能力的方法，在该方法中，对存在于该细胞中并为TPAP表达所必须的一个DNA序列进行修饰或使其失活，以便降低该细胞的TPAP产量，或不产生TPAP。

17.如权利要求16的方法，其中，所述DNA序列编码TPAP或其表达TPAP活性所必须的部分。

18.如权利要求16的方法，其中，所述DNA序列是从TPAP编码DNA序列表达TPAP所需的调节序列。

19.如权利要求18的方法，其中，所述DNA序列是一个启动子序列或其功能片段。