[发明专利]具免疫抑制活性的单克隆抗体片段

说明书

II类主要组织相容性复合物(MHC)分子可结合抗原肽片段，并将它们呈递给辅助(CD4⁺)T细胞(“Th”细胞)(参考文献1)。对II类MHC分子具特异性的单克隆抗体(mAb)已被证实是在体外Th细胞反应中效力极高的选择性抑制剂(参考文献2)。自从发现它们之后，它们已被视为用于自身免疫疾病(如类风湿性关节炎)的选择性免疫抑制治疗的有效药物。最初的活体研究表明，这些mAb对Th细胞的有益作用介导了异源-和自身免疫的反应(参考文献3-6)。然而在某些情况下，把II类MHC特异性mAb的活体实验应用与导致实验室灵长类动物死亡的未预料到的并发症联系起来了(参考文献7、8)。后一观察结果阻碍了人们对MHC特异性mAb免疫调节作用进一步研究的兴趣。据最近的出版文献所描述，II类MHC在转基因小鼠体内表达降低10倍造成了因无效的抗原呈递而引起的Th细胞的无反应性(参考文献19)。这表明了II类MHC表达的降低与活体模型中的免疫抑制有关系。

依据本发明，已令人惊奇地发现，具有下调HLA-DR表达能力的mAb的单价mAb片段(Fab)可以自身下调这种HLA-DR表达而不引起mAb本身或mAb二价片段[F(ab)′₂]的细胞毒性。因此本发明的Fab片段是无细胞毒性副作用的有效II类MHC特异性免疫抑制化合物。

在更详细描述本发明之前，先简要描述下列附图：

图1DR结合性竞争肽和DR特异性mAb对EBV转化的B细胞系Priess的作用。

图2mAb L243对LG2的调控和细胞毒性作用时间过程。

图3在除去mAb之后L243对LG2的调控和细胞毒性作用的持续时间。

图4在与DR特异性mAb L243及其片段共培养之后，HLA-DR表达对不同APC群体的下调作用。

图5DR特异性Fab片段浓度的不断增加对EBV转化的B细胞系LG2的作用。

图6L243及其片段的延长性共培养对LG2细胞的作用。

图7EBV-LCL细胞毒性对DR-交联的依赖性。

图8DR下调作用对静止B细胞和单核细胞/巨噬细胞的选择性。

图9DR下调作用对B细胞胚细胞的选择性。

图10DR下调作用对LG2细胞的选择性。

图11由mAb引起的DR下调作用的同种异型非选择性。

图12由1-1C4 Fab引起的对TS-10细胞的泛II类下调作用。

图13LG2和Priess细胞与L243及其片段的共培养引起TNFα分泌增加不足。

图14Th细胞抑制和DR下调所需要的抗体浓度。

图15抗DR mAb和Fab片段对固定性APC引起的抗原呈递的作用。

图16抗原负载对mAb、Fab和肽颉颃物的作用。

图17Fab和肽对抗原剂量-反应曲线的相对作用。

图18II类颉颃物对正在进行的Th细胞反应的作用。

对HLA-DR[类型“DR”的人的白细胞抗原；II类主要组织相容性复合物(MHC)分子]具特异性的某些单克隆抗体(mAb)可以下调白细胞[其是约90％的抗原呈递细胞(“APC”)]表面HLA-DR分子的表达。同样的mAb还可以抑制人的Th细胞克隆的活化，后者需要由HLA-DR分子引起的抗原呈递。与目前所使用的肽颉颃物相比，这些mAb的抑制效力要高出几百至几千倍(参见下列表1)。这种HLA-DR表达的下调和Th细胞活化的抑制是一种可引起免疫抑制的药物活性。这种免疫抑制可用于治疗自身免疫疾病，特别是类风湿性关节炎。

依据本发明，已令人惊奇地发现，具有下调HLA-DR表达能力的mAb的单价、抗原结合性mAb片段(Fab)可以自身下调这种HLA-DR表达而不引起mAb本身或mAb二价片段[F(ab)′₂]的细胞毒性。因此本发明的Fab片段是无细胞毒性副作用的有效II类MHC特异性免疫抑制化合物。这样，本发明含有抗HLA-DR mAb的Fab片段，其中所述完整的mAb对抗原呈递细胞具细胞毒性并可下调剩余抗原呈递细胞上的HLA-DR的表达。这样的mAb可抑制Th细胞的活化。从其中衍生出本发明Fab片段的mAb都结合在HLA-DR的第一区域中。

依据本发明可使用的三种下调性mAbs的实例是：

LB3.1(小鼠IgG_2b，泛-DRα1-特异性；参考文献9-10)；