[发明专利]通过与固定化寡核苷酸形成三螺旋纯化DNA的方法

权利要求书

1.双链DNA的纯化方法，其特征在于包括至少以下步骤：将含所述DNA和其他成份的混合物溶液通过共价偶联有寡核苷酸的载体，其中寡核苷酸能够通过杂交与所述DNA中存在的特定序列形成三螺旋。

2.权利要求1的方法，其特征在于含所述DNA的溶液是细胞裂解液。

3.权利要求2的方法，其特征在于细胞裂解液为裂解清液。

4.权利要求1的方法，其特征在于双链DNA是经过预纯化的。

5.权利要求1的方法，其特征在于DNA上存在的特定序列含有高嘌呤-高嘧啶序列，寡核苷酸含有与该高嘌-呤高嘧啶序列形成三螺旋的序列。

6.权利要求1-5之一的方法，其特征在于特定序列是人工引入双链DNA中的。

7.权利要求5的方法，其特征在于寡核苷酸含有多聚-CTT序列，DNA上特定序列为一多聚GAA序列。    

8.权利要求5的方法，其特征在于寡核苷酸具有以下序列GAGGCTTCTTCTTCTTCTTCTTCTT(SEQ ID No.1)。

9.权利要求5的方法，其特征在于寡核苷酸具有(CTT)₇序列(SEQID No.26)。

10.权利要求8或9的方法，其特征在于DNA上特定序列含有序列(GAA)₇、(GAA)₁₄或(GAA)₁₇。

11.权利要求5的方法，其特征在于DNA上的特定序列含有序列SEQ IDNo.5，而寡核苷酸含有序列SEQ ID No.6或SEQ ID No.7。

12.权利要求5的方法，其特征在于DNA上的特定序列含有序列SEQ IDNo.17，而寡核苷酸含有序列SEQ ID No.18。

13.权利要求5的方法，其特征在于DNA上的特定序列含有序列(GA)₂₅，而寡核苷酸含有序列SEQ ID No.19。

14.权利要求1-5之一的方法，其特征在于特定序列是天然存在于DNA双链上的特定序列。

15.权利要求14的方法，其特征在于天然存在于DNA上的特定序列是存在于质粒复制起始区中的高嘌呤-高嘧啶序列。

16.权利要求15的方法，其特征在于特定DNA序列包含含于大肠杆菌复制起始区ColEI中的序列SEQ ID No.2的全部或部分。

17.权利要求16的方法，其特征在于寡核苷酸含序列SEQ ID No.3。

18.权利要求14的方法，其特征在于特定DNA序列包括含于质粒pBR 322的β-内酰胺酶基因中的序列SEQ ID No.4或SEQ ID No.8的全部或部分。

19.以上权利要求之一的方法，其特征在于寡核苷酸通过二硫键、硫醚键、酯键、酰胺键或胺键偶联在载体上。

20.权利要求19的方法，其特征在于寡核苷酸通过由一碳链(CH₂)_n组成的臂固定在柱子上，其中n为1-8间包括端点的整数，所述臂通过磷酸酯与寡核苷酸相连，而通过酰胺键与柱子相连。

21.权利要求20的方法，其特征在于所述臂由含6个碳原子的直碳链组成。

22.权利要求20的方法，其特征在于所述臂由含12个碳原子的直碳链组成。    

23.以上权利要求之一的方法，其特征在于寡核苷酸含有至少一种化学修饰，使其耐核酸酶或保护其不受核酸酶破坏、或提高其对特定序列的亲和力。

24.权利要求23的方法，其特征在于寡核苷酸含一高嘧啶序列，其中至少胞嘧啶是甲基化的。

25.以上权利要求之一的方法，其特征在于DNA还含有一个或多个目标治疗序列。

26.以上权利要求任一项的方法，其特征在于双链DNA是诸如质粒的环形DNA。