[发明专利]人Criptin生长因子

说明书

本发明涉及新鉴定的多核苷酸，通过该多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸和多肽的用途以及该多核苷酸和多肽的生产。更具体地讲，本发明的多肽经推断鉴定为人Criptin生长因子，在下文中有时称作“CGF”。本发明也涉及抑制该多肽的作用。

生长因子和其他促分裂原包括转化癌基因能迅速诱导一系列基因被特定细胞表达(Lau，L.F.和Nathans，D.，细胞调节的分子方面，6：165-202(1991))。这些基因被命名为立即早期或早期应答基因，其与生长因子或促分裂原接触几分钟后即被转录活化，不依赖于从头蛋白质合成。一组这样的立即早期基因编码分泌的胞外蛋白，这些蛋白是协调复杂生物学过程如分化和增殖、再生和伤口愈合所必需的(Ryseck，R.P.等，细胞生长分化，2：235-233(1991))。

在由生长因子触发的级联事件中这些立即早期基因的表达作为“第三信使”。还认为它们是整合和协调复杂生物学过程如分化和伤口愈合所必需的，在这些过程中细胞增殖是一常见事件。

criptin生长因子由某些类型的癌细胞如胰腺癌过量表达和分泌。

本发明的CGF显示与美国专利No.5,256,643(以其全文作为参考)公开的cripto生长因子有氨基酸序列同源性，cripto生长因子已知是一种有用的肿瘤标记，其经常在结肠癌中被增量调节并在胰腺癌中表达。

根据本发明的一个方面，提供了一种新的成熟多肽及其具有生物学活性并在诊断学或治疗学上有用的片段，类似物与衍生物。

根据本发明的另一个方面，提供了编码本发明的多肽的分离的核酸分子，该核酸分子包括mRNA，DNA，cDNA，基因组DNA，及其类似物和其具有生物学活性并在诊断学或治疗学上有用的片段和衍生物。

根据本发明的另一个方面，提供了通过重组技术生产这种多肽的方法，该方法包括在促进所述蛋白表达及所述蛋白的随后回收的条件下培养含有编码本发明的多肽的核酸序列的重组原核和/或真核宿主细胞。

根据本发明的再一个方面，提供了一种利用该多肽或编码该多肽的多核苷酸用于治疗目的的方法，例如治疗肌肉消耗症、骨质疏松、辅助移植物固定、刺激伤口愈合和组织再生、促进血管生成以及刺激血管平滑肌增殖和内皮细胞产生。

根据本发明的又一个方面，提供了抗这种多肽的抗体。

根据本发明的另一个方面，提供了抗这种多肽的拮抗剂，其可用于抑制这种多肽的作用，例如在伤口愈合和肺纤维变性过程中限制过量结缔组织的产生。

根据本发明的另一个方面，提供了含有足够长的核酸分子的核酸探针，该探针可以特异地杂交到编码本发明的多核苷酸序列上。

根据本发明的又一个方面，提供了用于检测与本发明多肽的过度表达以及编码此多肽的核酸序列中的突变有关的疾病的诊断测定方法。

根据本发明的又一个方面，提供了一种利用这种多肽或编码这种多肽的多核苷酸用于与科学研究、DNA合成以及DNA载体的生产有关的体外目的的方法。

根据本文的教导，本发明的这些以及其它方面对于本领域的技术人员而言应该是显而易见的。

下面的附图仅仅意味着是对本发明的具体实施方案的说明，而并不意味着以任何的方式限制本发明。

图1示出了本发明的多肽的cDNA序列以及相应推导的氨基酸序列，使用了标准的单字母氨基酸缩写。测序用37 3自动DNA测序仪(Applied Biosystems，Inc.)进行。

图2示出本发明的多肽(上行)和cripto生长因子(下行)之间的氨基酸序列同源性。

根据本发明的一个方面，提供了分离的核酸(多核苷酸)，其编码具有图1的推导的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的成熟多肽或者编码由1995年5月11日保藏于ATCC、保藏号为No.97142的克隆的cDNA所编码的成熟多肽。

编码本发明的多肽的多核苷酸最初从人胰腺癌组织所得到的cDNA文库中发现。它在结构上与人cripto生长因子相关，并且含有一个编码230个氨基酸残基的蛋白质的开放读框，其中该多肽起始的23个氨基酸残基为推定的信号序列，从而该成熟多肽包含207个氨基酸。如图2所示，本发明的多肽具有与cripto生长因子相同的保守半胱氨酸残基。

另外，本发明的多肽具有一包含SEQ ID NO：2的45-128位氨基酸的推定的可溶部分，因此129-207位氨基酸是推定的转膜部分。

起始Northern印迹分析显示在胰腺癌细胞中有非常高的表达。