[发明专利]细菌素

说明书

本发明涉及一种细菌素、产生所述细菌素的菌株、制备所述细菌素的方法以及所述细菌素和/或产生所述细菌素之菌株在生产食品和化妆品中的应用。

细菌素已从许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中分离出。细菌素是一类其本质为蛋白质而且具有杀菌作用的分子，正因为此，它能够在其产生菌与一种或多种不同的细菌之间引起拮抗反应。而且，细菌素的抑菌谱通常局限于与产生细菌素菌种非常相关的菌种。

确切地说，细菌素已在乳酸菌中得以证实。例如，EP0643136(Societe des produits Nestle)描述了从嗜热链球菌中鉴定的两种细菌素。类似地，从乳酸乳球菌中也已分离到一种细菌素(App.and Env.Microbio.58，279-284，1992；J.of Bio.Chem.268，16361-16368，1993)。

然而，至今尚不了解得自易变微球菌中的细菌素。易变微球菌目前被大量地用于食品领域。尤其是用于鲜肉的发酵以制备如意大利香肠和腊肠的熟食制品。因此，易变微球菌将在获得可抵抗致病因子的产细菌素菌株方面非常有用。本发明的目的就是针对这一需要而提出的。

为此，本发明的细菌素即为易变微球菌细菌素，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者是通过1-4个氨基酸的一次取代，缺失和/或插入而不同于序列SEQ ID NO：1的任何氨基酸序列。

而且，任何编码该细菌素的核苷酸片段，尤其是具有序列SEQ ID NO：2的核苷酸片段也在本发明的范围内。

类似地，本发明的菌株为产生该细菌素的易变微球菌，尤其是易变微球菌菌株CNCM I-1586和CNCM I-1587。

在制备本发明细菌素的方法中，在适于菌株生长的培养基和生长条件下培养产所述细菌素的易变微球菌菌株，特别是菌株CNCM I-1586或菌株CNCMI-1587，以得到含10⁷-10¹¹生物体/ml的培养物培养基，然后将所得培养物离心，制备含细菌素的上清液提取物。

最后，本发明易变微球菌细菌素的用途包括将其核苷酸序列及其信号序列、含细菌素的上清液提取物和产所述细菌素的易变微球菌菌株用于制备食品和化妆品。

本发明的细菌素在下文中将被称为“易变素”(Variacin)。

在本发明中，任意单位(arbitrary Unit au)被定义为样品在技术人员已知的“琼脂孔试验”中仍然表现出杀菌作用时的最大稀释值的反比。

在本发明中，术语“片段”或“DNA片段”应理解为作为部分或完整编码并能被合成，通过例如已知的聚合酶链反应方法在体外进行复制或在例如E.coli中进行体内复制的单链或双链DNA片段。

在本发明中，“同源片段”被理解为通过小量碱基的取代、缺失或插入而仅仅不同于本发明片段的任何片段。在说明书中，两个由于遗传密码简并性而编码一个和相同多肽的DNA片段尤其应该被认为是同源的。与本发明的片段有80％以上同源性的片段也将认为是同源片段。在后一种情况下，同源性由同源片段中的碱基数与本发明片段中的碱基数之比确定。

最后，本发明含义中的“杂交片段”应理解为能够与本发明的片段经Southern印迹法杂交(Sambrook et al.，Molecular Cloning，ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，USA，1989，Chapter 9.31-9.58)的任何片段。优选地，在苛刻或严格条件下进行杂交，以避免非特异性杂交或相对不稳定的杂交。

我们已从菌株CNCM-I-1586和CNCM I-1587分离出一种蛋白质性因子，即具有强力杀菌作用的细菌素。该细菌素得自易变微球菌，并显示为下文所描述的氨基酸序列SEQ ID NO：1，它已被命名为易变素。

根据易变素所提供的意义，本发明还涉及具有不同于SEQ ID NO：1之氨基酸序列的任何细菌素，所述的差别是由于1-4个氨基酸的一次取代，缺失和/或插入造成的。因此，上述具有因1-4个氨基酸的一次取代，缺失和/或插入而不同于序列SEQ ID NO：1之氨基酸序列的细菌素可以比例如所述易变素有更广的细菌属或细菌种的抑菌谱。

还有可能选择编码得自两个菌株CNCM I-1586和CNCM I-1587之本发明易变素的染色体核苷酸片段。所述片段显示为下文所给出的序列SEQ ID NO：2。