[发明专利]新的脂酶基因和用该基因产生脂酶的方法

说明书

发明所属技术领域

本发明涉及编码脂酶(其作为去垢剂、食品加工、造纸和石油制造等的脂降解酶在工业上有用)的新基因及其核苷酸序列、编码参与脂酶产生之蛋白质的基因及其核苷酸序列、携带这些基因的重组载体、携带所说的重组载体的转化体以及使用所说的转化体产生脂酶的方法。

背景技术

产生脂酶的微生物已知有假单胞菌属、产碱菌属、毛霉属、假丝酵母属、腐质霉属、根毛霉属等的微生物。曾从其中一些分离出基因，具体来说，从假单孢菌属微生物分离出许多脂酶基因。目前已知这样的脂酶基因包括从下列种获得的基因：莓实假单胞菌(日本专利公开昭62-228279和平2-190188)、葱头假单胞菌(日本专利公开Sho 33-47079和Hei 387187)、恶臭假单胞菌(EP 268 452)、类产碱假单胞菌(日本专利公开Hei 3500845)、铜绿假单胞菌(EP 334 462)、荚壳伯克霍尔德氏菌(应用环境微生物，(1992)，3738-3791)以及荧光假单胞菌(应用环境微生物，(1992)58，1776-1779)。

已知由脂酶结构基因的下游基因区域编码的蛋白质在假单孢菌属的一些细菌中参与产生脂酶。下游区域中的基因对于在葱头假单胞菌中脂酶的产生是必要的，和宿主细菌的物种无关(EP 331 376)。另外已知和宿主细菌的物种无关，具有稳定脂酶作用的蛋白质由从荚壳伯克霍尔德氏菌产生的脂酶区域编码(EP 464 922)。

另外，类产碱假单胞菌的同源宿主-载体系统具有促进脂酶产生的作用，但在其异源的宿主-载体系统中下游区域的基因对于脂酶产生不是必要的(EP 334 462)。而且，下游区域中的基因在莓实假单胞菌中不存在。

通常知道，当去垢剂与脂酶混合以降解和除去要洗涤的物品上所附的脂类时可以提高去垢剂的洗涤效果。这种用途在H.Andree等，“作为去垢剂组分的脂酶”，应用生物化学杂志，2，218-229(1980)等中描述。

优选地，与去垢剂混合的脂酶在去垢剂溶液中可令人满意地发挥它的脂酶活性。在日常的洗涤条件下，洗涤溶液的pH值保持在碱性区，因此需要脂酶在碱性pH值下起作用。另外，已知脂类污迹通常在高温和高碱性的条件下相对容易除去，但在低温下(60或更低)洗涤不能充分地除去。不仅在日本洗涤通常在低温下进行，而且在欧洲各国和美国，洗涤的温度也可能降低。这样，优选地，混合在去垢剂中的脂酶即使在低温下也应令人满意地起作用。另外，更优选的是：混合进去垢剂的脂酶在洗涤期间即使在去垢剂组分(如包含在许多去垢剂中的表面活性剂、蛋白酶或漂白剂)存在时应充分地显示出它的功能。而且，优选地，当包含在去垢剂中的组分共存甚至当脂酶在去垢剂中以混合状态存储时，混合进去垢剂的脂酶应该是稳定的。

产生脂酶的微生物已知有假单胞菌属、产碱菌属、无色杆菌属、毛霉属、假丝酵母属、腐质霉属、根毛霉属等的微生物。因为得自这些细菌菌株的大多数脂酶在中性至微碱性区域内具有最适pH，脂酶在碱性去垢剂溶液中不能有效地作用或是在其中很不稳定。而且，在阴离子表面活性剂存在时，得自无色杆菌属、毛霉属、假丝酵母属、腐质霉属的个别脂酶活性受到强烈的抑制。

假单孢菌属产生脂酶的细菌包括莓实假单胞菌、葱头假单胞菌、类产碱假单胞菌、铜绿假单胞菌以及荧光假单胞菌，但是从这些细菌菌株中分离的已知酶不能满足上述性质。

发明描述

本发明涉及有效地产生用于工业领域且具有极好性质的脂酶(具体来说是得自菌株SD705的脂酶S(FERM BP-4772))的方法。

更具体来说，本发明涉及编码脂酶S的基因及其核苷酸序列、编码参与脂酶S产生的蛋白质的基因及其核苷酸序列、携带这些基因的重组载体、用这样的重组载体转化的转化体以及从这样的转化体产生所说的脂酶S的方法。

附图的简更描述

图1是质粒pS1的限制性图谱。

图2是质粒pS1S的限制性图谱。

图3是质粒pS1E的限制性图谱。

图4是质粒pSL1的限制性图谱。

图5是质粒pSL2的限制性图谱。

图6是质粒pSP1的限制性图谱。

图7是质粒pSP2的限制性图谱。

图8描述了质粒pAP1、pAP2和pAP3的构建。

图9描述了质粒pSB1的构建。

图10描述了质粒pSB2的构建。

发明详述