[发明专利]诱发猪生殖和呼吸综合征(PRRS)的病毒的新的减毒株,由其产生的疫苗和诊断试剂盒及其制备方法

说明书

发明领域

本发明涉及一种能诱发猪生殖和呼吸综合征(PRRS)的病毒的新的减毒株。用来源于猴肾的新细胞克隆对毒性株进行减弱和复制的方法可用于制备疫苗和诊断试剂盒，以早期诊断PRRS，并对该疾病进行有效的预防性治疗。

现有技术

1987年，人们在北美首次发现一种猪的疾病，当时称为“神秘的猪病”或MSD，以后又称作“猪不育和呼吸综合征”或SIRS。1990年，在中欧首次发现相似的综合征，以后又传播到包括西班牙在内的其它欧洲国家。开始时，欧洲称此病为“流行性猪流产和呼吸综合征”或PEARS，最后称之为“猪生殖和呼吸综合征”或PRRS。这个名称逐渐被广泛接受。

已知PRRS的病原体是一种包围RNA的小病毒，它是在荷兰首次分离到的被称作Lelystad病毒。有人提出，该病毒属于动脉病毒(Arterviridae)。该病毒在专利申请PCT WO-92/21375及欧洲专利EP-B-05 87780(Stichting Centraal Diegeneeskundig Instituut)中已有描述，而后者来源于前者。为这些申请的目的，上述病毒的分离物被保藏于巴黎的巴斯德研究所，保藏号为I-1102。

如专利申请PCT WO-93/03760(Collins等)和欧洲专利申请EP-A-0529584(Boehringer Ing.)中所述，北美型病毒的分离几乎与欧洲型病毒的分离同时进行。为这些申请的目的，上述病毒的分离物被保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号为VR-2332。

欧洲型和北美型病毒有明显的不同，这不仅表现于血清学反应性而且涉及到主要RNA片段核苷酸序列的同源程度。在欧洲专利申请EP-A-0676467(Akzo)的前两页中对二者的不同进行了详细描述，且引用了大量的文献。在上述的专利申请中得出这样的结论，欧洲型病毒和美洲型病毒在很久以前就已明确地分离。因此可预料，对其中一个类型可能有效的疫苗对另外一个类型效果很小或根本无效。

从欧洲和美洲型病毒均分离到不同的毒株。每一毒株具有其独特性，有几种毒株已成为专利申请的目标。例如，专利申请PCT WO-93/07898(Akzo)描述了一种欧洲毒株，及由之产生的疫苗，保藏于CNCM(巴斯德研究所)，保藏号I-1140。来源于同一优先权申请的专利申请PCT WO-93/14196和欧洲专利申请EP-A-541418(Rhōne-Merieux)，描述了在法国分离到的一种新的毒株，保藏于CNCM(巴斯德研究所)，序号I-1153。欧洲专利申请EP-A-0595436(Solvay)描述了一种新的美洲毒株，其毒力强于开始时描述的毒株，其中还描述了其疫苗。该毒株保藏于ATCC，但在专利申请中没有详述其保藏号。最后，序号为ES-A-2074950(Cyanamid Ibērica)的西班牙专利申请描述一种叫做“西班牙毒株”的毒株，它不同于欧洲和美洲毒株，这种“西班牙毒株”保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心(EACCC)保藏号为V93070108。

总之，PRRS的病原体很明显地表现出一些多样性，并且为了有效地与该疾病作斗争，需要依感染猪的毒株类型而不同的疫苗。

在母猪中，该疾病的特征在于缺乏食欲，厌食，生殖性疾病(流产，早产，死产或产虚弱的小猪，胚胎死亡，有或没有干尸化)。有时感染的母猪会死亡。一种较少出现的症状是耳部、腹部或外阴部出现短暂的蓝色；因此该疾病起初在荷兰被称作“Abortus blauw”，在英国被称为“蓝耳”。在小猪中，这些症状是年龄依赖性的；在新生的小猪中，可观察到呼吸困难和肌肉震颤，而在较大些的小猪中，后部的麻痹和共济失调则更常见。在流行的高峰期，出生第1天的死亡率是有限的，但在10天大的小猪中可达到80％。感染的育肥猪出现短暂的少食和较多的呼吸系统的问题。

疾病的潜伏期变化很大，从5天至37天(I.B.RobertsonEurp.Comm.Seminar on PRRS，11：4-5，布鲁塞尔，1991)。有时，该疾病的传播非常慢，但是，当一个农场感染的时候，该疾病可持续数月(B.Thacker，Int.Symp.on SIRS，St.Paul/Minnesota，1992)。