[发明专利]异源基因在细菌细胞中的染色体表达

权利要求书

1.一种产生异源兴趣蛋白质的方法，该方法包括下列步骤：

将染色体转化DNA转移到细菌宿主细胞中，其中所说的染色体转化DNA包含至少编码异源兴趣蛋白质基因的一个拷贝和选择标记，其中所说的宿主细胞包含染色体；

对所说的染色体转化DNA整合到所说的宿主染色体进行选择，形成的宿主细胞染色体包含编码异源兴趣蛋白质的基因和侧翼于重复DNA的选择标记，所说的基因可操作地连接到在宿主细胞中有功能的启动子上；和

表达所说的基因，在多拷贝质粒载体中构建转化DNA的过程中，其中所说的基因决不可操作地连接到在宿主细胞有功能的启动子上，其中所说的非细菌兴趣蛋白质在所说的宿主细胞中积累水平超过总细胞蛋白的0.1％。

2.权利要求1的方法，其中所说的染色体转化DNA还包含所说的在宿主细胞中有功能的启动子，所说的启动子可操作地连接到编码异源兴趣蛋白质的基因上，并且

3.权利要求1的方法，其中所说的宿主细胞染色体还包含宿主细胞启动子，所说的染色体转化DNA还包含与所说的宿主细胞启动子下游的细菌染色体片段同源的DNA序列，所说的DNA序列符合读框地连接到所说的编码异源兴趣蛋白质的基因上，其中所说的染色体转化DNA的整合导致在所说的DNA序列与此宿主细胞的启动子之间可操作连接的形成。

4.权利要求1的方法，其中所说的非细菌兴趣蛋白质在所说的宿主细胞中的积累水平超过总细胞蛋白的1％。

5.权利要求1的方法，其中所说的异源兴趣蛋白质是真核蛋白质。

6.权利要求1的方法，其中所说的异源兴趣蛋白质是哺乳动物蛋白质。

7.权利要求1的方法，其中所说的重复DNA包含所说的连接到所说的启动子上的编码异源兴趣蛋白质的基因。

8.权利要求1的方法，该方法还包括在所说的染色体转化DNA整合到所说的宿主细胞的染色体上后，对所说的染色体转化DNA的染色体扩增进行选择。

9.一种产生染色体转化DNA的方法，该方法包括：将各个第一质粒载体的限制性片段与第二质粒载体连接，进而产生所说的染色体转化DNA，所说的第一载体包含缺乏可操作连接的启动子的编码异源兴趣蛋白质的基因，所说的第二载体包含在宿主细胞中有功能的启动子，其中所说的染色体转化DNA包含选择标记、所说的可操作地连接到所说的启动子上的编码异源兴趣蛋白质的基因、侧翼于此基因的重复DNA，并在所说的宿主细胞中缺乏合适的复制起点。

10.一种产生染色体转化DNA的方法，该方法包括：将各个第一质粒载体的限制性片段与第二质粒载体连接，进而产生所说的染色体转化DNA，所说的第一质粒包含编码异源兴趣蛋白质的第一基因和在宿主细胞中有功能的第一启动子，并且其中所说的第一基因与第一启动子没有可操作地连接，所说的第二载体包含编码异源兴趣蛋白质的缺乏可操作地连接的启动子的第二基因和在宿主细胞中有功能的第二启动子，其中所说的染色体转化DNA包含选择标记，但在所说的宿主细胞中没有合适的复制起点，并且所说的第一基因与染色体转化DNA的第二启动子可操作地连接，所说的第二基因与染色体转化DNA的第一启动子可操作地连接。

11.一种染色体转化DNA，该DNA包含：可操作地连接到在宿主细胞中有功能的启动子上的编码异源兴趣蛋白质的基因和选择标记，所说的选择标记侧翼于重复DNA；其中所说的编码异源兴趣蛋白质的基因决不可操作地连接到在宿主细胞中有功能的多拷贝的质粒载体的启动子上。

12.一种染色体转化DNA，该DNA包含：编码异源兴趣蛋白质的基因的两个拷贝和选择标记，其中的每一个拷贝都可操作地连接到在宿主细胞中有功能的启动子上；所说的选择标记侧翼于所说的编码异源兴趣蛋白质的基因的拷贝；所说的基因的每一个拷贝决不可操作地连接到在宿主细胞中有功能的多拷贝的质粒载体的启动子上。