[发明专利]酶活性的选择性灭活

说明书

技术领域

本发明涉及一种灭活在包含所需酶的酶混合物中的一种或多种不需要的酶的方法。

背景技术

现有技术已熟知在微生物以获得一种所需要的酶时，一种或多种不需要的酶通常也被该微生物表达，如果这些不需要的酶没有被有效地灭活，它们可能导致在所需酶的回收和/或所需酶的贮藏中的很大的稳定性问题。甚至即使这些其它酶不导致稳定性问题，由于产业上出于许多目的需要没有副活性的“纯”酶，因此它们可能的确是不希望的。

为了解决上述问题，已提出了许多建议：Hoerle等在US 4,086,139中公开了使用次氯酸离子和亚氯酸离子来灭活淀粉酶-蛋白酶混合物中的淀粉酶；Bock等在DD 216 955中描述了通过加入尿素可将聚半乳糖醛酸酶从果胶酶混合物中除去，和Destefanis等在EP 021 179中公开了通过将体系的pH调节至5.0至7.0之间，用缓冲剂缓冲该混合物，并将所述混合物加热至40℃-75℃的温度可将蛋白酶-淀粉酶混合物中的芽孢杆菌属蛋白酶灭活。

本发明的一个目的是提供一种灭活酶混合物中不需要酶的方法，该方法应具有短的处理时间，产生高产率，并且同时应是简单，廉价和与工业需求相适应的。

发明概述

已惊奇地发现通过使用本发明可有效地灭活许多不需要的酶。

因此，本发明涉及一种灭活包含一种所需酶的酶混合物中的至少一种不需要的酶的方法，包括步骤

a)将混合物置于2℃-75℃的温度、pH小于5.0下至少20秒；和/或

b)将混合物置于2℃-75℃的温度、pH大于9.0下至少20秒。

附图简要说明

通过参考附图进一步说明本发明，其中

图1表明在pH3.5和45℃(I)、50℃(II)、55℃(III)和70℃(IV)下，脂酶活性与灭活时间的函数关系，该实验如实施例1所描述的方法进行。

图2表明在pH3.5，45℃(I)、50℃(II)、55℃(III)和70℃(IV)下，蛋白酶活性与灭活时间的函数关系，该实验如实施例1所描述的方法进行。

图3表明未处理样品(I)和置于pH3.5、45℃下60分钟的样品(II)的稳定性试验，该实验如实施例1的描述的方法进行。

图4表明在pH3.5，45℃(I)、50℃(II)、55℃(III)，60℃(IV)和70℃(V)下，脂酶活性与灭活时间的函数关系，该实验如实施例2所描述的方法进行。

图5表明在pH3.5，45℃(I)、50℃(II)、55℃(III)、60℃(IV)和70℃(V)下，蛋白酶活性与灭活时间的函数关系，该实验如实施例2所描述的方法进行。

图6表明三种不同酶脂样品的稳定性试验：在pH2.5，20℃下处理60分钟的样品(I)，在pH10.7，20℃下处理60分钟的样品(II)和未处理样品(III)，该实验如实施例3所描述的方法进行。

发明详述

本发明涉及一种灭活包含一种所需酶的酶混合物中至少一种不需要的酶的方法，包括步骤：

a)将混合物置于2℃-75℃，pH小于5.0下至少20秒；和/或

b)将混合物置于2℃-75℃，pH大于9.0下至少20秒。

我们在本发明中使用的原理是酶通常能耐酸性(pH小于5.0)或耐碱性环境(pH大于9.0)。我们将一事实与讨论的酶的温度耐受范围(2℃-75℃)和我们将酶混合物置于所述条件下的时间结合起来以获得最佳条件，其中保留了大部分所需酶，且大部分不需要的酶被灭活。这样该方法在三个参数可以变化的体系中进行：pH、温度和放置时间。

在一些情况下，加入稳定剂可能是有利的，其中该稳定剂稳定所需的酶；该稳定剂应在使用本发明方法之前加入。该稳定剂的实例为所需酶的抑制剂、辅因子或底物：现有技术已熟知当酶与抑制剂、辅因子或底物(如羧甲基纤维素(CMC))结合时，它变得更加稳定，实施例7中给出了其中使用CMC的一个实例。

在一些情况下，加入去稳定剂也可能是有利的，其中该去稳定剂使不需要的酶失稳定；该去稳定剂应在使用本发明方法之前加入。可用的去稳定剂可为络合剂，尤其是金属离子络合剂，如EDTA和EGTA。

而且，在一些情况下同时加入稳定所需酶的稳定剂和不需要的酶的去稳定剂可能是有利的。不需要的酶

非常常见的一类不需要的酶是蛋白水解酶(蛋白酶，肽酶)，因为它们能降解蛋白质，并且由于酶是蛋白质，蛋白水解酶能降解所需要的酶。