[发明专利]大熊猫全基因组DNA提取方法

权利要求书

1、一种大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1)在大熊猫全基因组DNA提取材料中按1∶1的比例加入80％乙醇，

  室温静置，离心分离，取沉淀；

2)在1)所得沉淀中加入90％乙醇，室温静置，离心分离，取沉淀；

3)在2)所得沉淀中加入100％乙醇，室温静置，离心分离，取沉淀；

4)将3)所得沉淀入滤纸袋内，封口，放入临界点干燥器样品室，由钢瓶

  加入液态二氧化碳，至液态二氧化碳液面超过纸袋最高点为止；

5)样品室加温至31℃，大气压为72.8毫米汞柱后，维持两小时，

  打开放气阀门，排出气体，取出纸袋；

6)将纸袋内样品放入研钵内，加入液氮，研为粉末，按1∶1比例加入T

  NE缓冲液，移入离心管内，加入蛋白酶K和SDS，于55℃保温

  消化；

7)分别用苯酚提抽，氯仿提抽，95％冷乙醇沉淀，吸出大熊猫全基因组

  DNA，真空干燥，于4℃下保存备用；

其中，大熊猫全基因组DNA提取材料是新鲜粪便、火盆烘烤粪便、福尔马林固定粪便、乙醇固定粪便、尿液、福尔马林固定器官组织、乙醇固定器官组织、石蜡包埋器官组织、陈旧标本皮肤。

2、如权利要求1所述的大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于DNA提取材料是粪便和尿液时，应进行两次离心分离，即加入80％乙醇，室温静置，离心分离后，先取上层清液，再将上层清液再次离心分离，最后取沉淀。

3、如权利要求1所述的大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于DNA提取材料是石蜡包埋器官组织时，需先用二甲苯脱蜡。

4、如权利要求1所述的大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于离心分离速度为3000～4000转/分。

5、如权利要求1所述的大熊猫全基因组DNA提取方法，其特征在于加入蛋白酶K和SDS后，使终浓度分别为50mg/l和0.5％(重量)。