[发明专利]银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立

权利要求书

1.一种银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立，其特征在于：本发明是以包括银杏叶片或根皮的外植体为材料，用活化了的发根农杆菌进行转化，使发根农杆菌Ri质粒的T-DNA整合到银杏外植体细胞核DNA中，表达形成毛状根，也称之为发根；每一根银杏发根即为一个单克隆，经过继代培养和多次筛选，逐步建立起银杏发根悬浮培养无性系。

2.按权利要求1所述银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立，其特征在于：灭菌后的银杏叶片或根皮外植体的感染，是将外植体浸入活化了的发根农杆菌菌液(≥1×10⁶个/ml到1×10⁸个/ml)中，感染时间为20分钟到2小时；并加入适量不包括银杏的植物发根浸出液和二价金属离子。

3.按权利要求1所述银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立，其特征在于：被感染的外植体培养在含抗菌素无激素≥0.25到0.5MS固体培养基上，在≥24℃到26℃，于暗中或散射光下，培养时间为≥20天到50天，诱导银杏出发根。

4.按权利要求1所述银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立，其特征在于：诱导出的发根需继代扩增，≥10到20天继代一次；对各发根克隆进行反复比较选择；并经≥3～5代液体悬浮适应性培养，再按银杏发根克隆来源分别建立不同的发根无性繁殖系。

5.按权利要求1所述银杏发根的转化及其无性繁殖系的建立，其特征在于；筛选出新的银杏发根培养基(YXFGl)配方，较MS培养基的效果好≥100～300％。YXFGl成分(mg/L)如下：KNO₃1200～3000；CaCl₂·2H₂O100～500；MgSO₄·7H₂O150～450；NH₄NO₃ 100～300；KH₂PO₄ 100～400；KI0.5～1.5； H₃BO₃ 2～8；MnSO₄·H₂O  5～25； ZnSO₄·7H₂O  1～10； Na₂MoO₄·2H₂O 0.1～0.5；CuSO₄·5H₂O 0.01～0.4；CoCl₂·6H₂O 0.01～0.4；Na·EDTA 10～40；FeSO₄·7H₂O；肌醇50～1000；烟酸0.5～5；盐酸硫胺素0.5～10；盐酸吡哆醇0.25～2.0；蔗糖1～4％；pH4.5～6.0。

6.按权利要求1所述银杏发根的转化及其无性繁殖系建立的原理，运用银杏发根产生愈伤组织可制备和筛选出激素自主型银杏细胞悬浮培养无性系。