[发明专利]培养有甲醇代谢途径的微生物的方法

权利要求书

1培养具有甲醇代谢途径的微生物的方法，在所述微生物中导入了含有连接在甲醇可诱导之启动子下游的靶基因的表达单位；其中在包括连续或定期加入甲醇的培养过程中，将加入速率调整到等于或小于所述微生物的最大甲醇消耗速率。

2根据权利要求1的方法，其中所述的甲醇加入是定期完成的，而且以培养基中的溶解氧浓度与甲醇加入过程同时波动的速率加入甲醇。

3根据权利要求1或2的方法，其中所述的甲醇加入是定期完成的，而且通过检测培养基中因甲醇浓度降低而引起的溶解氧浓度的升高来开始每个时期的甲醇加入。

4根据权利要求2或3的方法，其中在所述溶解氧浓度定期波动的过程中，培养基中的甲醇浓度等于或小于0.1％(v/v)。

5根据权利要求1-4的任一方法，其中所述微生物是甲基营养型酵母。

6根据权利要求5的方法，其中所述甲基营养型酵母是属于毕赤氏酵母属，汉逊酵母属或假丝酵母属的微生物。

7根据权利要求6的方法，其中所述酵母是巴斯德毕赤氏酵母，多形汉逊酵母和博伊丁氏假丝酵母。

8根据权利要求1-7的任一方法，其中当细胞密度至少为0.5g/L干细胞重(DCW)时，甲醇的消耗速率为0.01-0.02ml/g DCW·h。

9根据权利要求1-8的任一方法，其中所述能够用甲醇诱导的启动子为醇氧化酶基因的启动子，甲酸脱氢酶基因的启动子或甲醇氧化酶基因的启动子。

10根据权利要求9的方法，其中所述甲基营养型酵母是博伊丁氏假丝酵母，而且所述启动子是博伊丁氏假丝酵母的醇氧化酶基因启动子。

11根据权利要求1-10的任一方法，其中所述靶基因是编码有用蛋白质的基因。

12根据权利要求11的方法，其中所述有用蛋白质是酶或其它生理学活性物质。

13根据权利要求12的方法，其中所述酶是Kex 2蛋白酶，激素原转化酶1/3(PC1/3)，激素原转化酶2(PC2)，弗林蛋白酶，肽C末端α-酰胺酶，葡萄球菌蛋白酶V8，无色杆菌蛋白酶I(API)，胎盘亮氨酸氨肽酶，胞质血小板激活因子乙酰水化酶和其衍生物。

14根据权利要求13的方法，其中在培养基中分泌所述Kex 2蛋白酶的衍生物。

15根据权利要求12的方法，其中所述生理学活性物质是生长激素，生长激素释放激素，促肾上腺皮质激素(ACTH)释放激素，胰高血糖素，胰高血糖素样肽I，胰高血糖素样肽II，干扰素α，干扰素β，干扰素γ，促红细胞生成素(EPO)，血小板生成素(TPO)，G-CSF，HGF，组织血纤维蛋白溶酶原(tPA)，干细胞因子，TGF家族和其衍生物。