[发明专利]不含二硫键的鲑鱼和鳗鱼降钙素类似物及其制备方法

说明书

本发明涉及不含二硫键的鲑鱼和鳗鱼降钙素类似物，制备它们的方法，及它们治疗骨质疏松症、Paget’s症、骨痛、各种高血钙症及与血钙过高引起的有关疾病中的用途。

天然降钙素能治疗骨质疏松症，Paget’s症、骨痛、各种高血钙症等。天然降钙素都是由32个氨基酸残基组成的单链多肽，目前已知的天然降钙素包括人、猪、牛、鸡、鼠、鱼等动物的降钙素。不同种属的天然降钙素其氨基酸残基不同，但都包括由1，7位半胱氨酸形成的二硫键，C-端都是脯氨酰胺结构。在天然降钙素中，以鱼类(鲑、鳗)的活性最高，鲑鱼降钙素(Salmon calcitonin，sCT)和鳗鱼降钙素(Eel calcitonin，eCT)的活性约是人降钙素(Human calcitonin，hCT)的30倍(Epand R M，Caulfield M P．Calcitonin and parathyroid hormone receptors，In：Comprehensive Medicinal Chemistry，Emmett J T，Ed；Pergamon：Oxford；Vol．3：1023-1045，1990．) 。

sCT和eCT的氨基酸序列如下：

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-

 1                       7

Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-

Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH₂          (sCT)

                32

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-

 1                       7

Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-

Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro-NH₂          (eCT)

                32

天然降钙素中1，7位Cys形成的二硫键对人、鼠等的降钙素是活性必须基团，不含二硫键的hCT类似物基本没有活性。但是二硫键对鱼的降钙素活性影响不大，例如用其它环取代sCT或eCT中的二硫环[Fujii，S，Yamamoto I，shimizu F，et al．Preparation of calcitonin derivatives andcalcium metabolism-improving agents．Eur Pat Apll EP 397，985(1990)．]，以及用Cys(Acm)或Ala取代sCT或eCT中的1，7位Cys而形成的非环状类似物[Orlowski R C，Epand R M，Stafford A R，et al．biologicallypotent analogues of salmon calcitonin which do not contain an N-terminaldisulfide bridged ring structure．Eur J Biochem，1987，162(2)：399．]都保持活性。天然降钙素的稳定性差，其中在溶液中的不稳定性与二硫键的不稳定性有关且天然降钙素的来源也很有限。因此寻找合成简单，成本低廉，稳定性好并同时具有与天然降钙素活性基本相同的降钙素类似物，是十分必要的。

本发明的目的是寻找易人工合成且保持有天然降钙活性的降钙素类似物。

本发明者经广泛深入研究，现已发现具下面通式(Ⅰ)的新降钙素类似物，其不仅合成简单，而且保持了与天然降钙素基本相同的活性。本发明因此得以完成。

因此，本发明第一方面涉及的是新的不含二硫键的通式(Ⅰ)sCT及eCT类似物。    

AA1-(Ser)m-Asn-Leu-Ser-Thr-AA2-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-

Gln-Glu-Leu-His-Lys-(Leu-Gln-Thr-Tyr)n-Pro-Arg-Thr-X-Y

-Thr-Pro-NH₂                     (Ⅰ)