[发明专利]新颖的雌激素受体

说明书

本发明涉及属于核激素受体总科的受体，特别是甾类受体领域。本发明涉及编码新颖甾类受体的DNA，所述受体的制备，该受体蛋白及其应用。

甾类激素受体属于基因表达的配体依赖转录控制中所涉及的核激素受体总科。此外，此总科由非甾类激素如维生素D、甲状腺激素和类视黄素的受体所组成(Giguere等人《自然》(Nature)330，624-629，1987；Evans，R.M.，《科学》(Science)240，889-895，1988)。而且，核受体样序列的范围业已鉴定，它编码所谓的“孤独”受体：这些受体结构上与核受体相关，因此划分入核受体，虽然还没有推断的配体被鉴定出来(B.W.O＇Malley，《内分泌学》(Endocrinology)125，1119-1170，1989；O.J.Mangelsdorf和R.M.Evans，《细胞》(细胞)83，841-850-1995)。

核激素受体总科共享有这样一种组件结构，在该结构中显示六个截然不同的结构与功能区，A至F(Evans，《科学》(Science)240，889-895，1988)。核激素受体的特征在于，可变N-末端区(A/B功能区)，接着是位于中央的，高度保守的DNA-结合功能区(下文称作DBD；C功能区)，可变铰链区(D功能区)，保守的配体结合功能区(下文称作LBD；E功能区)和可变C-末端区(F功能区)。

N-末端区在大小和序列上高度可变，在该总科的不同成员间保守性差。受体的这一部分参与转录活化的调控(Bocquel等人，《核酸研究》(Nucl.Acid Res)，17，2581-2595，1989；Tora等人)，《细胞》(Cell)59，477-487，1989)。

DBD由大致66至70个氨基酸组成，且主管DNA结合活性：它使受体定向于称作激素效应元件(下文称作HRE)的特异性DNA序列，而HRE在染色质上的特异性靶基因之转录控制单位内(Martinez和Wahli，《核激素受体》(Nuclear Hormone Receptors)，Acad.Press，125-153，1991)。

LBD位于受体的C-末端部分，且主管配体结合活性。以这种方式，LBD是识别和结合激素配体所必需的，且此外具有转录活化功能，因此决定受体激素应答的特异性和选择性。虽然在结构上中度保守，但已知LBD在核激素受体总科的各个成员间的同源性上有相当大的变化(Evans，《科学》(Science)240，889-895，1988；P.J.Fuller，FASEB J.，5，3092-3099，1991；Mangelsdorf等人，《细胞》(Cell)，Vol.83，835-839，1995)。

存在于N-末端区、LBD和DBD上的功能可相互独立地操作，且业已显示，这些功能区可以在核受体间交换(Green等人，《自然》(Nature)，Vol.325，75-78，1987)。这就导致嵌合核受体，如在例如WO-A-8905355中所描述的。

当核受体的激素配体通过扩散进入细胞并被LBD识别时，它将结合到特异性受体蛋白上，因此起动受体蛋白的变构变化。这种变化的结果是，配体/受体配合物变换至转录活性状态，且因此而能够通过存在的高亲合性DBD结合到在染色质DNA上的相应HRE上(Martinez和Wahli，NuclearHormone Receptors，125-153，Acad.Press，1991)。以这种方式，配体/受体配合物调控特异性靶基因的表达。通过此科的受体获得的变异是其应答不同配体能力的结果。

甾类激素受体是截然不同的一类核受体总科，其特征在于配体是甾类激素。糖皮质激素(GR)、盐皮质激素(MR)、孕甾酮(PR)、雄激素(AR)和雌激素(ER)的受体是典型的甾类受体。再者，活化时，甾类受体具有结合至回文DNA序列的独特的能力，回文DNA序列被称作HRE，为同型二聚体。GR、MR、PR和AR识别相同的DNA序列，而ER识别不同的DNA序列(Beato等人，Cell，Vol，83，851-857，1995)。结合DNA后，甾类受体被认为是与基础转录机制的组分相互作用，且带有序列特异的转录因子，因此调控特异性靶基因的表达。