[发明专利]癌胚抗原基因启动子DNA的克隆方法、序列及其用途

权利要求书

1．一种含人胃癌癌胚抗原基因启动子DNA的克隆载体，其特征在于：由下列DNA元件组成：

(1)、癌胚抗原(CEA)分泌性肿瘤细胞表达的特异启动子--癌胚抗原基因上游调控序列；

(2)、大肠杆菌质粒骨架(包括大肠杆菌复制子和氨苄青霉素抗性β内酰氨酶基因)。

2．如权利要求1所述的DNA的克隆方法，其特征在于：创建了一对适当的PCR引物，

引物Ⅰ:5′-AATTGAGCTCTCCATCCACCTTGCCGAA,

引物Ⅱ:5′-GCTCAAGCTTACTCCATGGTCTCTGCTG)，

该对引物不仅具有癌胚抗原启动子DNA高度保守而特异的序列，而且分别含有Sacl,HindⅢ酶切位点序列。

3．如权利要求2方法克隆的基因启动子DNA的序列，其特征是：具有癌胚抗原基因启动子活性必须序列区(-90到+60)，但与现有技术从结肠癌细胞分离的CEA基因启动子相比，在+93位不是G，而是C:↓-156AAGATTGTCT GAGGAACTGA AAATAGAAGG GAAAAAAGAG  -116GAGGGACAAA AGAGGCAGAA ATGAGAGGGG AGGGGACAGA  -76GGACACCTGA ATAAAGACCA CACCCATGAC CCACGTGATG  -36CTGAGAAGTA CTCCTGCCCT AGGAAGAGAC TCAGGGCAGA  +5GGGAGGAAGG ACAGCAGACC AGACAGTCAC AGCAGCCTTG  +45ACAAAACGTT CCTGGAACTC AAGCTCTTCT CCACAGAGGA  +85GGACAGACCA GACAGCAGAG ACCATGGAGT +115

↑+93

(箭头后的数字表示箭头所指的碱基在癌胚抗原基因启动子DNA中所处的序列编号，无箭头的数字表示其左侧碱基的序列编号。)

4．根据权利要求2方法克隆的具有权利要求3序列的基因启动子的用途，其特征在于：作为一种大肠杆菌质粒，可在大肠杆菌大量扩增，经简单纯化，使用特别设计并已连接于在该基因克隆DNA两端的不同酶切位点酶切，即可将其切下，并可定向插入新的基因治疗用载体(如病毒或质粒载体等)，在该段DNA调控下，外源性治疗基因(如TK等肿瘤自杀基因，抑癌基因、细胞凋亡基因、细胞因子、反义核苷酸等1只在表达CEA的肿瘤细胞才发生表达，从而可用于CEA分泌性肿瘤，如胃癌、大肠癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌等恶性肿瘤的基因治疗、与预防复发等目的。