[发明专利]来自芳族新陈代谢/I的物质的微生物制备

权利要求书

1.微生物制备物质的方法，其中在生产这些物质的微生物中增加转醛酶活性，而在所述微生物中磷酸烯醇丙酮酸(PEP)依赖性糖吸收系统的活性存在、降低或消失。

2.按照权利要求1的方法，其特征在于，在下述微生物中实现物质制备，所述微生物在增加转醛酶活性之前，没有从先前带有磷酸转移酶系统(pts⁺菌株)的菌株中将所述微生物作为磷酸转移酶系统关闭的菌株(pts^-菌株)进行选择。

3.按照权利要求1或2的方法，其特征在于，制备其合成涉及至少一个戊糖磷酸途径的中间体的物质。

4.按照权利要求3的方法，其特征在于，所述中间体是4-磷酸赤藓糖(Ery4P)。

5.按照权利要求1或4的方法，其特征在于，增加大肠杆菌转醛酶活性。

6.按照权利要求1-5之一的方法，其特征在于，增加大肠杆菌转醛酶B(TalB)活性。

7.按照权利要求1-6之一的方法，其特征在于，额外增加转酮酶活性。

8.按照权利要求7的方法，其特征在于，增加大肠杆菌转酮酶活性。

9.按照权利要求7或8之一的方法，其特征在于，增加大肠杆菌转酮酶A(TktA)活性。

10.按照权利要求1-9之一的方法，其特征在于，额外增加PEP不依赖性糖吸收系统的转运蛋白的活性和/或使相关糖磷酸化的激酶的活性。

11.按照权利要求10的方法，其特征在于，所述转运蛋白是易化蛋白(facilitator)。

12.按照权利要求11的方法，其特征在于，所述易化蛋白是活动发酵单胞菌葡萄糖易化蛋白(Glf)。

13.按照权利要求10-12之一的方法，其特征在于，所述激酶是己糖磷酸化激酶。

14.按照权利要求13的方法，其特征在于，所述激酶得自活动发酵单胞菌。

15.按照权利要求14的方法，其特征在于，所述激酶是活动发酵单胞菌葡糖激酶(Glk)。

16.按照权利要求10-15之一的方法，其特征在于，如果存在PEP依赖性糖吸收系统，则另外降低或消除其活性。

17.按照权利要求1-16之一的方法，其特征在于，

a)通过引入所述基因

b)和/或通过增加所述基因拷贝数

c)和/或通过增加基因表达

d)和/或通过增加所述酶的内源活性

e)和/或通过改变酶的结构

f)和/或通过使用去调节的酶

g)和/或通过插入编码去调节酶的基因

增加至少一个下述元件，即转醛酶、转酮酶、转运蛋白和激酶的活性。

18.按照权利要求17的方法，其特征在于，通过将一个或多个基因加入一个或几个基因结构中实现所述活性的增加，而所述一个或多个基因作为单拷贝或以增加的拷贝数引入到所述基因结构中。

19.按照权利要求1-18之一的方法，其特征在于，使用另外参与所述物质合成的一个或多个酶被去调节和/或显示活性增加的微生物。

20.按照权利要求1-19的方法，其特征在于，制备的所述物质是芳族氨基酸。

21.按照权利要求20的方法，其特征在于，所述芳族氨基酸是L-苯丙氨酸。

22.按照权利要求1-21之一的方法，其特征在于，使用的微生物属于大肠杆菌属、沙雷氏菌属、芽胞杆菌属、棒状杆菌属或短杆菌属。

23.按照权利要求22的方法，其特征在于，所述微生物是大肠杆菌。

24.重组形式的基因结构，包括：

a)编码转醛酶的基因或编码转醛酶的基因和编码转酮酶的基因，和

b)至少一个编码PEP不依赖性糖吸收的转运蛋白或编码糖磷酸化激酶的基因。

25.按照权利要求24的基因结构，其特征在于，所述转运蛋白的基因编码易化蛋白，而所述激酶的基因编码己糖磷酸化激酶。