[发明专利]用重组生物体生产甘油的方法

权利要求书

1.由重组生物体生产甘油的一种方法，包括：

(i)用包含以下一种或两种基因的表达盒转化合适的宿主细胞：

(a)甘油-3-磷酸脱氢酶的编码基因；

(b)甘油-3-磷酸酶的编码基因；

(ii)在存在选自单糖、寡糖、多糖和一碳底物的至少一种碳源的情况下培养步骤(i)的转化宿主细胞，由此生产甘油；以及

(iii)回收步骤(ii)中产生的甘油。

2.按照权利要求1的方法，其中所述表达盒包含编码甘油-3-磷酸脱氢酶活性的基因。

3.按照权利要求1的方法，其中所述表达盒包含编码甘油-3-磷酸磷酸酶活性的基因。

4.按照权利要求1的方法，其中所述表达盒包含编码甘油-3-磷酸磷酸酶活性和甘油-3-磷酸脱氢酶活性的基因。

5.按照权利要求1的方法，其中所述合适宿主细胞选自细菌、酵母和丝状真菌。

6.按照权利要求5的方法，其中所述合适宿主细胞选自柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、梭菌属(Clostridium)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、气杆菌属(Aerobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus)、曲霉属(Aspergillus)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、接合酵母属(Zygosaccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、念珠菌属(Candida)、汉逊酵母(Hansenula)、德巴利酵母属(Debaryomyces)、毛霉属(Mucor)、球拟酵母属(Torulopsis)、甲基酵母属(Methylobacter)、埃希氏菌属(Escherichia)、沙门氏菌属(Salmonella)、芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)和假单胞菌属(Pseudomonas)。

7.按照权利要求6的方法，其中所述合适宿主细胞是大肠杆菌或酵母属。

8.按照权利要求1的方法，其中所述碳源是葡萄糖。

9.按照权利要求1的方法，其中甘油-3-磷酸脱氢酶的编码基因对应于SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含不引起该酶功能特性改变的氨基酸取代、缺失或插入。

10.按照权利要求1的方法，其中编码甘油-3-磷酸酶的基因对应于SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以包含不引起该酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

11.根据权利要求1的方法，其中甘油激酶编码基因对应于SEQ IDNO：15所示氨基酸序列，而其中所述氨基酸序列可以包含不引起所述酶功能改变的氨基酸取代、缺失或加入。

12.转化宿主细胞，含有编码甘油-3-磷酸脱氢酶活性的基因。

13.转化宿主细胞，含有编码甘油-3-磷酸磷酸酶活性的基因。

14.通过互补作用选择甘油-3-磷酸脱氢酶基因表达的方法，包括给由于所述菌株甘油-3-磷酸脱氢酶基因突变产生的甘油或甘油-3-磷酸营养缺陷型菌株提供甘油或甘油-3-磷酸。

15.通过互补作用选择甘油-3-磷酸脱氢酶基因表达的方法，包括给由于所述菌株甘油-3-磷酸脱氢酶基因突变产生的渗透敏感型菌株提供盐。

16.大肠杆菌pAH 21/DH5α，含有所述GPP2基因并鉴定命名为ATCC 98187。

17.大肠杆菌pDAR1A/AA200，含有所述DAR1基因并鉴定命名为ATCC 98248。