[发明专利]化学修饰的酶

权利要求书

1.一种修饰酶，其中有一个或多个氨基酸被半胱氨酸残基置换，其中半胱氨酸残基通过用提供硫醇侧链的选自以下基团的取代基置换硫醇氢来修饰：

a)-SR¹R²其中，R¹是烷基，而R²是带电或极性组分；

b)-SR³，其中R³是取代的或非取代的苯基；

c)-SR⁴，其中R⁴是取代的或非取代的环己基；和

d)-SR⁵，其中R⁵是C₁₀-C₁₅烷基。

2.权利要求1的修饰酶，其中R¹是C_1-10烷基。

3.权利要求1的修饰酶，其中R₂是带正电荷的。

4.权利要求3的修饰酶，其中R²是NH₃⁺。

5.权利要求1的修饰酶，其中R₂是带负电荷的。

6.权利要求5的修饰酶，其中R²是SO₃^-。

7.权利要求1的修饰酶，其中酶是蛋白酶。

8.权利要求7的修饰酶，其中蛋白酶是迟缓芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶。

9.权利要求7的修饰的蛋白酶，其中用半胱氨酸置换的氨基酸选自精氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和丝氨酸。

10.权利要求9的修饰的蛋白酶，其中精氨酸是蛋白酶的亚位点。

11.权利要求10的修饰的蛋白酶，其中亚位点是S₂。

12.权利要求11的修饰的蛋白酶，其中精氨酸在62位。

13.权利要求1的修饰酶，在R³或R⁴之前进一步包含烷基R以形成-SRR³或-SRR⁴。

14.权利要求13的修饰酶，其中R是C_1-10烷基。

15.一种修饰酶，其中一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基置换，其中半胱氨酸残基通过用提供硫醇侧链-SR⁶的取代基置换硫醇氢来修饰，其中R⁶是C_1-6烷基并且其中氨基酸残基选自精氨酸、亮氨酸和丝氨酸。

16.一种制备修饰酶的方法，包括

(a)提供其中一个或多个氨基酸被半胱氨酸残基置换的酶；并且

(b)用提供硫醇侧链的选自以下基团的取代基置换硫醇氢：

a)-SR¹R²，其中R¹是烷基，而R²是带电或极性组分；

b)-SR³，其中R³是取代的或非取代的苯基；

c)-SR⁴，其中R⁴是取代的或非取代的环己基；和

d)-SR⁵，其中R⁵是C_10-C15烷基。

17.权利要求16的方法，其中R¹是C_1-10烷基。

18.权利要求16的方法，其中R₂是带正电荷的。

19.权利要求18的方法，其中R²是NH₃⁺。

20.权利要求16的方法，其中R₂是带正电荷的。

21.权利要求20的方法，其中R²是SO₃^-。