[发明专利]均相溶胶－溶胶测定

说明书

本发明的领域

本发明涉及使用包括2种分离的溶胶颗粒的均相溶胶颗粒测定来测定流体样品中配体量的方法。更具体地说，本发明涉及一种溶胶颗粒测定，其中一种溶胶结合到配体上，另一种溶胶结合到能与特定配体偶联的物质上。

本发明的背景

在许多分析领域中能检测或定量样品中以非常低浓度存在的物质的方法是重要的工具。包含包括测量如尿和血液的生物流体临床样品中低浓度的分析物的方法和检测样品中少量的药物和诸如杀虫剂和除草剂的化学品的痕量残留的方法。

为了有用，测定流体样品中低水平物质的方法必须高度灵敏和精确。诸如免疫测定的以受体为基础的测定是该方法的例子且通常用于检测诸如血液和尿的生物学流体的临床样品中非常低浓度的物质。免疫测定经过使用与待测物质(例如，第一抗体)特异性反应的抗体来检测这些物质。免疫测定以许多方式进行分类。一种重要的分类是测定系统中的异相/均相差示，另一分类是测定系统中的竞争/夹层差示。在异相系统中，该测定需要通过一种固定的结合配体(例如，一种抗体)从结合到固相的成份中分离游离成份。在均相系统中，该测定不需要分离结合和游离相。在竞争方式中，感兴趣的物质和标准成份竞争诸如抗体上的结合位点，该结合位点在异相系统中存在于或结合在固相上。在夹层测定中，标记成份结合到感兴趣的物质上，而该物质是抗体或结合于抗体上。在异相系统中，抗体是一种固相或结合于固相上。

大多数免疫测定经过实际测量标记物或标记的二级现象，如放射活性，酶活性，荧光，散射光，生物发光或化学发光实现定量初级抗体-抗原反应。这些测定各自存在某些缺陷，如复杂的程序，使用昂贵的设备和有毒试剂。在放射免疫测定(RIA)中，用放射性同位素标记抗原或抗体。RIA测量免疫复合物中放射性标记的量，该复合物是样品中感兴趣的物质或分析物量的一种功能。RIA可使用夹层或竞争测定方式。尽管已证实RIA在许多诊断情况下有用，这类测定有许多缺陷。例如，该测定需要复杂的且昂贵的仪器来测量放射标记。放射性同位素具有有限的保质期，且由于它们是危险品，因此这类测定的使用者需要专业化训练。放射性同位素也需要专业化的处理技术。

已建立了使用非放射性标记物的其它测定，例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)，免疫荧光测定和化学发光测定。ELISA方式经过测量酶底物反应来检测分析物。例如，酶连接到抗体或抗原上以保护酶活性及连接物免疫学反应性的方式形成一种连接物。选定的酶典型地作用于底物产生有色的或荧光产物。反应期间，加入连接物并结合到感光趣的分析物上(以夹层的方式)或与感兴趣的分析物进行竞争(以竞争性方式)。然后加入酶的底物。结合到分析物上的酶连接物的量与加入的底物的转换相关，而该转换又与分析物的量相关。这些测定相对于放射免疫测定具有某些优点，如快速，低花费和去掉了放射活性物质。然而，ELISA具有酶不稳定和程序复杂的缺点。

在Hansen的美国专利号5 286 452中描述的另一类测定包括向含有多种分析物的样品中加入不同大小的或不同包被的单一亚基球形颗粒，例如：乳胶珠。作为与分析物相互作用的结果该颗粒凝集或不能凝集。在流式颗粒分析仪(FPA)中测定凝集量。经过获得凝集的乳胶珠的散射光可测量结合的程度。由于需要测量通过流动细胞的光散射而限制了该技术。