[发明专利]rDSPAαI的产生方法

权利要求书

1．一种从生物培养基中纯化rDSPAα1的方法，该方法包括下列步骤：

(a)在导致rDSPAα1和阳离子交换树脂选择性地结合的装载条件下将培养基加入到阳离子交换树脂上；

(b)可以洗涤也可以不洗涤阳离子交换树脂以除去非rDSPAα1蛋白和非蛋白杂质；

(c)从阳离子交换树脂选择性地洗脱结合的rDSPAα1；

(d)在导致rDSPAα1和疏水作用树脂选择性地结合的装载条件下将步骤(c)中的含有rDSPAα1的洗脱液加入到疏水作用树脂上；

(e)可以洗涤也可以不洗涤疏水作用树脂以除去非rDSPAα1蛋白和非蛋白杂质；

(f)从疏水作用树脂选择性地洗脱结合的rDSPAα1；

(g)在导致rDSPAα1和亲和层析树脂选择性结合的装载条件下将步骤(f)中的含有rDSPAα1的洗脱液加入到亲和层析树脂上；

(h)可以洗涤也可以不洗涤亲和层析树脂以除去非rDSPAα1蛋白和非蛋白杂质；

(ⅰ)从亲和层析树脂选择性地洗脱结合的rDSPAα1，以产生水溶液形式的实质上纯化的rDSPAα1。

2．权利要求1的方法，其中的生物培养基是条件培养基。

3．权利要求1的方法，其中在步骤(a)中的阳离子交换树脂由用羧基或者羧烷基基团衍生的硅凝胶微粒、交联琼脂糖或者交联聚甲基丙烯酸酯聚合物组成。

4．权利要求3的方法，其中的阳离子交换树脂由共价结合到多亚乙基二胺硅烷上的硅微粒的基质组成，其中多亚乙基二胺硅烷的氨基基团已用羧基基团衍生化。

5．权利要求3的方法，其中在步骤(a)中的装载条件包括在pH4-7之间使用培养基。

6．权利要求4的方法，其中使用含有50mM NaPhos和100mM-500mM NaCl的缓冲液和相同离子强度的缓冲液进行步骤(c)中的rDSPAα1洗脱。

7．权利要求1的方法，其中在(d)步骤中的疏水作用树脂是一种不带电荷的的树脂，其用长度为1-10个碳原子的烷基链或者芳香基-烷基基团衍生化。

8．权利要求7的方法，其中不带电荷的的树脂由硅凝胶微粒、交联琼脂糖或者交联聚甲基丙烯酸酯聚合物组成。

9．权利要求7的方法，其中不带电荷的的树脂由乙二醇和异丁烯酸型聚合物(用丁基基团衍生化的)的共聚合反应合成的半刚性球形珠组成。

10．权利要求9的方法，其中在步骤(d)中的装载的条件包括在pH3-5之间使用步骤(c)的洗脱液。

11．权利要求9的方法，其中在步骤(d)中的装载的条件包括在含有50mM NaPhos和500mM NaCl(用磷酸将pH调节到4)或相同离子强度的缓冲液进行步骤(c)中的洗脱。

12．权利要求9的方法，其中在步骤(f)中的洗脱是使用含有20mMHCl并具有大于25％的乙醇浓度的缓冲液来完成的。

13．权利要求12的方法，其中乙醇浓度在28.5％和30％之间。

14．权利要求12的方法，其中乙醇浓度是29％。

15．权利要求1的方法，其中步骤(g)中的亲和层析树脂由以直径为25-75μm的珠的形式的烯丙基葡聚糖和N,N′-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚物组成。

16．权利要求15的方法，其中所说的珠能够分级分离20,000-8,000,000kDa的球状蛋白。

17．权利要求15的方法，其中所说的步骤(g)中的装载条件包括在pH1-4时使用步骤(f)的洗脱液。

18．权利要求15的方法，其中所说的步骤(ⅰ)中的洗脱是使用含有200mM甘氨酸的缓冲液(pH3-6)或具有相等离子强度的缓冲液来完成的。

19．权利要求1的方法，该方法还包括浓缩rDSPAα1的水溶液。

20．权利要求19的方法，该方法还包括冷冻干燥浓缩的rDSPAα1溶液。