[发明专利]制取高纯环孢菌素A及相关环孢菌素的色谱分离方法

说明书

本发明涉及一个新的提纯环孢菌素A(Cy A)及相关环孢菌素的色谱分离方法，该方法适用于医药工业中。

据该方法，可以以经济有利的条件制备医药上可接受纯度的活性物质，即所制得的环孢菌素A的纯度例如完全符合PHARMEUROPA(PHARMEUROPA，第4卷，第四期，第270页，1992年12月)的纯度要求。

A Rüegger及其同事[Helv.Chim.Acta 59,112,(1976)]成功地从多孢木霉属(LINK exPERS)分离出环孢菌属A，这是人们第一次制得的一个新的，具有极强免疫抑制性的物质。经过25年以上的认真研究后，人们熟悉了具有免疫抑制性及抗真菌活性的相关环孢菌素[R Traber等人，Helv.Chim.Acta 70,13(1987)]。

目前，人们毫不怀疑地认定，环孢菌素A是在进行有机器官移值手术后，用于抑制免疫防御性的，具有突出功能的药剂，因此，往日人们不遗余力地努力改进的制备方法，使得制取的救命药剂能满足日愈提高的，在量与质方面的要求。

迄今沿用的，用于提纯含有环孢菌素A的粗提取液的技术解决方法大多数包括了多级的色谱分离方法，其中使用了作为洗提剂的有机溶剂。

因此，上述的A.Rüegger所作的工作，首先是在不断增加甲醇的条件下在硅胶60 Merck(0.063-0.2毫米)上，用氯仿进行色谱分离，接着将得到的产物放在Sephadex LH 20上，在甲醇中进行凝胶色谱分离，然后，将其放在氧化铝上(Brockmann,Aktl)，在甲苯中，在不断提高加入量的醋酸乙酯的条件下，进行色谱分离。

后来的研究工作中，也使用了类似的方法(见表1)。

经常使用的吸附剂是sephadex LH 20，硅胶60Merck(0.063-0.2毫米)，以及中性氧化铝。

所用的展开剂相可以是大多数的有机溶剂混合物。

由于氯仿与二氯甲烷其有高毒性，它不仅作为溶剂能残留在制得的活性物质中，而且在大量地加工处理这些物质(蒸馏物，废物排除)时会产生安全工艺问题，因此，在实际中是不大适用的。

此外，在使用梯度或复杂的例如三元的等临界混合物时，在洗提物蒸发之后重新加入展开剂是复杂的，昂贵的。

在加拿大专利文献，CA 2 096 892中，BIOGAL描述了类似的方法，其中，在进行色谱分离以前，对粗提取液进行温度处理，即在约一个小时的时间内，将粗提取液加热到110℃，接着在5个小时内，冷却至室温，然后，在一级的硅胶60色谱仪中，在加入高含量的氯化烃的情况下，经过两次依次加入展开剂后，可分离制得约15％给料量的环孢菌素A，其纯度约为97.6％，但是，这种方法在工业规模上不能满足所制取的活性物质在产率与纯度上的要求。此外，这种复杂的天然物质，由于其对热的不稳性，以及可能的同分异构化作用。因此不适宜受温度作用的影响。

迄今所知的用一级色谱分离提纯的专利申请只有FUJISAWA(WO 9 213094)和BIOGAL(CA2 096 892)，其中，当然需要昂贵的展开剂组合或梯度，为此，产生了对展开剂进行再生处理的问题。

对这些方法进行精确的判断，仍缺乏大多数的有关产率与产品纯度的数据资料。