[发明专利]表层蛋白的重组表达

权利要求书

1．制备表层蛋白的方法，其中

(a)提供了一种转化有编码表层蛋白的核酸的革兰氏阴性原核宿主细胞，这种编码表层蛋白的核酸选自：

(ⅰ)含有SEQ ID No:1中第1-3684位核苷酸序列的核酸，其中可选择性地不含有信号肽编码区，

(ⅱ)含有在遗传密码简并性范围内，与(ⅰ)中核酸一致的核苷酸序列的核酸，和

(ⅲ)含有能在严谨条件下，与(ⅰ)或/和(ⅱ)来源的核酸相互杂交的一段核苷酸序列的核酸；

(b)在能促使该核酸表达、生产由它所编码的多肽的条件下培养宿主细胞；以及

(c)从宿主细胞内分离由上述所产生的多肽。

2．按照权利要求1所述的方法，其中使用大肠杆菌宿主细胞。

3．按照权利要求1或2所述的方法，其中多肽是以装配型表层蛋白结构形式，从宿主细胞内部分离的。

4．按照权利要求1至3中任一项所述的方法，其中编码表层蛋白的核酸中包含有一个或数个插入片段，这些插入片段编码肽或多肽序列。

5．按照权利要求4所述的方法，其中插入片段选自编码下述物质的核苷酸序列：半胱氨酸残基，含有多个带电氨基酸或酪氨酸残基的区域，DNA结合性抗原决定基，金属结合性抗原决定基，免疫原性抗原决定基，变应原性抗原决定基，抗原性抗原决定基，抗生蛋白链菌素，酶，细胞因子或抗体结合蛋白。

6．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码抗生蛋白链菌素。

7．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码来源于疤疹病毒、优选为疤疹病毒6或口蹄疫病毒(foot-and-mouth diseaseFMDV)的免疫原性抗原决定基。

8．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码酶类，如多羟基丁酸合成酶或细菌荧光素酶。

9．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码细胞因子，如白细胞介素、干扰素或病毒坏死因子。

10．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码抗体结合蛋白，如蛋白质A或蛋白质G。

11．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码能结合细胞因子或内毒素的抗原性抗原决定基。

12．按照权利要求5所述的方法，其中插入片段编码金属结合性抗原决定基。

13．按照权利要求1至12中任一项所述的方法，其中一段编码革兰氏阳性信号肽的核酸序列有效地连接于编码表层蛋白的核酸的5’侧。

14．按照权利要求13所述的方法，其中编码信号肽的核酸包括

(a)SEQ ID No:1所示核苷酸序列内的信号肽编码区，

(b)在遗传密码简并性范围内，与(a)中序列一致的核苷酸序列，或/和

(c)与(a)或/和(b)中序列同源性至少为80％的核苷酸序列。

15．编码重组型表层蛋白的核酸，它选自

(ⅰ)包含有SEQ ID No:1中第1-3684位核苷酸序列的核酸，其中可选择性地不含信号肽编码区，

(ⅱ)包含有在遗传密码简并性范围内，与(ⅰ)中核酸一致的核苷酸序列的核酸，和

(ⅲ)包含有能在严谨条件下，与(ⅰ)或/和(ⅱ)来源的核酸相互杂交的一段核苷酸序列的核酸，

其中该核酸在表层蛋白编码区内包含至少一个编码肽或多肽的插入片段。

16．按照权利要求15所述的核酸，其中插入位点位于SEQ IDNo:1所示核苷酸序列中的第582,878,917,2504或/和2649位核苷酸处。

17．载体，其中包含有至少一拷贝按照权利要求15或16所述的核酸。

18．细胞，其中转化有按照权利要求15或16所述的核酸，或按照权利要求17所述的载体。

19．按照权利要求18所述的细胞，其中该细胞为革兰氏阴性原核细胞，尤其是大肠杆菌细胞。

20．按照权利要求18或19所述的细胞，其中包含有重组型表层蛋白结构。

21．重组型表层蛋白，它由权利要求15或16所述的核酸编码。