[发明专利]对HLA分子结合亲和力提高的肽

说明书

                    发明背景

本发明涉及预防、治疗或诊断许多病理状态的组合物和方法。特别提供能够结合选择的主要组织相容复合物(MHC)分子并诱导免疫反应的新肽。

MHC分子可分成Ⅰ型或Ⅱ型。Ⅱ型MHC分子基本上表达于参与激发和维持免疫反应的细胞，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。Ⅱ型MHC分子被辅助T淋巴细胞识别，并诱导辅助T淋巴细胞的增殖，和对呈现的特定免疫原性肽的免疫反应的放大。Ⅰ型MHC分子表达于几乎所有的有核细胞上，并被细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)识别，这种T淋巴细胞然后破坏带有抗原的细胞。CTLs在肿瘤排斥和抵抗病毒、真菌和寄生虫的感染中是十分重要的。

用两种不同的试验方法已经分析了Ⅰ型MHC分子的结合亲和力与分散的肽表位的免疫原性的关系(Sette等，免疫学杂志.，153:5586-5592(1994))。在第一种方法中，MHC分子结合亲和力在10000倍范围内变化的潜在表位的免疫原性在HLA-A^※0201转基因小鼠中进行了分析。在第二种方法中，用急性乙型肝炎病人的PBL评价了大约100种乙型肝炎病毒来源的不同的潜在表位的抗原性，这些表位都带有A^※0201结合基元。在这两种方法中，发现结合阈值约为500nM(优选500nM或更低)决定肽表位引起CTL反应的能力。这些结果与天然加工的肽或前面所述的T细胞表位的Ⅰ型结合亲和力的测定值十分相符。这些结果说明，在T细胞反应形成中决定基选择具有重要作用。

通常，CTL反应并不直接针对所有可能的表位。而是限于少数几个免疫优势决定基(Zinkernagel等，免疫学进展27,51-59(1979)；Bennink等，实验医学杂志168,1935-1939(1988)；Rawle等，免疫学杂志146,3977-3984(1991))。早就认识到免疫优势(Benacerraf等，科学175,273-279(1972))可以解释为一个给定的表位选择性地结合一个特定的MHC分子的能力(决定基选择理论)(Vitiello等，免疫学杂志131:1635(1983)；Rosenthal等，自然267,156-158(1977))，或被存在的TCR特异性选择性地识别(全能理论)(Klein,J.,Immunology,the Science of Self-Nonself Discrimination,John Wiley&Sons,New York,pp270-310(1982))。已经证实，另外的因素，大多数与处理过程相关，也在诱发严格的免疫原性以外的反应中起关键作用，这些因素中的多数潜在的决定基将以免疫优势的形式存在(Sercarz等，免疫学年评11,729-766(1993))。

调节一个特定的免疫原性肽与一个或多个HLA分子结合亲和力的能力，以及由此而调节由此肽引发的免疫反应的能力，将大大提高肽基疫苗和治疗制剂的用途。本发明提供这些和其它的优势。

                     发明概述

本发明提供用于疫苗和治疗学的肽和编码这些肽的核酸。本发明提供在病人身上诱导对预选的抗原产生细胞毒T细胞反应的方法。此方法包括将细胞毒T细胞与本发明的免疫原性肽接触。本发明的肽可能来源于许多抗原，包括病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原、真菌抗原等。本发明的方法可以在体外和体内进行。在优选实施方案中，向病人给予含有编码免疫原性肽序列的核苷酸分子，使肽与细胞毒T细胞接触。

在一个实施方案中，肽有约9-15个残基，以小于约500nM的解离常数结合至少2个HLA-A3样分子，并诱导细胞毒T细胞反应。此免疫原性肽具有包含一个结合基元的9残基序列，从N末端到C末端如下：

位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的的第二个初级锚定残基，选自R和K；和

一个或多个次级锚定残基，选自位于第3位的Y、F或W，位于第6位的Y、F或W，位于第7位的Y、F或W，位于第8位的P，以及这些的任意组合。

本发明进一步提供结合HLA-A^※0301基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的结合基元，从N末端到C末端如下：

位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和