[发明专利]对类风湿性关节炎特异的人T细胞克隆

权利要求书

1．人T细胞克隆，它以HLA-DR限制性识别来源于类风湿性关节炎患者滑膜细胞的类风湿性关节炎相关抗原。

2．权利要求1的人T细胞克隆，它与来源于该类风湿性关节炎患者的末梢血抗原呈递细胞单独作用，无反应。

3．权利要求1的人T细胞克隆，是HLA-DR4或HLA-DR9限制性的。

4．权利要求1的人T细胞克隆，其T细胞受体α链的CD3区域中有精氨酸。

5．权利要求1的人T细胞克隆，其T细胞受体的β链为Vβ6家族成员。

6．权利要求1的人T细胞克隆，其T细胞受体β链为Vβ12的家族成员。

7．权利要求1的人T细胞克隆，它在CD4阳性、有HLA-DR4或HLA-DR9的类风湿性关节炎患者来源的滑膜细胞的存在下进行增殖。

8．权利要求1-7中任一项的人T细胞克隆的制备方法，包括有以下工程：

(1)建立来源于类风湿性关节炎患者滑膜组织或滑液的T细胞克隆；

(2)筛选与该类风湿性关节炎患者来源的自身滑膜细胞进行反应的T细胞克隆；

(3)筛选与含有与该自身滑膜细胞不同HLA-DR的、来源于其它类风湿性关节炎患者的滑膜细胞不进行反应的T细胞克隆；和/或

(4)筛选表达同该自身滑膜细胞相同的HLA-DR、而与不表达来源于该自身滑膜细胞的类风湿性关节炎相关抗原的细胞不进行反应的T细胞克隆。

9．自身反应性T细胞克隆的制备方法，其特征在于向只对抗原特异性增殖的T细胞中添加有抗原呈递作用的细胞和滑膜细胞的可溶性物质，在适宜的条件下进行培养来建立T细胞株，然后按照权利要求8中的(3)和(4)项工程进行。

10．以权利要求1-6中任一项中T细胞克隆的反应性为指标，检测类风湿性关节炎相关抗原的方法。

11．权利要求10的类风湿性关节炎相关抗原的检测方法，它包括从可能为类风湿性关节炎的被检者滑膜细胞入手，将其可溶化，与权利要求1～6任一项中的T细胞克隆和来源于被检者的有抗原呈递作用细胞的可溶性物质进行反应，测定该克隆的反应性。

12与权利要求1-6任一项中的人T细胞克隆具有反应性的、来源于滑膜细胞的类风湿性关节炎相关抗原。

13．权利要求12的类风湿性关节炎相关抗原，用PBS作流动相，以0.5ml/分的流速，通过TSK胶、G3000SW柱进行的HPLC测定其分子量为25kDa或50kDa。

14．权利要求12中类风湿性关节炎相关抗原的激动剂或拮抗剂的筛选方法，它包括将预计含有该激动剂或拮抗剂的样品与特异性识别抗原的权利要求1中的T细胞克隆进行反应，测定该克隆的反应性。

15．含有人白细胞介素2、人末梢血单核细胞PHA刺激培养上清和胎牛血清的培养基。