[发明专利]对类风湿性关节炎特异的人T细胞克隆

说明书

技术领域

本发明涉及对自身免疫性疾病的诊断、预防和/或治疗有益的物质，具体而言，本发明涉及与类风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞所表达的、由特定的HLA-DR所呈递的抗原进行特异反应的T细胞克隆。

背景技术

本来免疫系统的应答是机体为了破坏、清除从外部侵入的异物而产生的应答，通常是对非己分子(抗原)特异的，但是，由于某种原因，机体识别自身分子和非己分子的功能发生障碍(自身免疫耐受异常)就会发生全身性红斑狼疮、硬皮病、多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(以下简称RA)等各种自身免疫性疾病。中年以后的女性易发RA，主要症状有关节肿胀和变形、疼痛及运动功能障碍，病理组织学上可看到覆于关节腔(关节囊)内侧的滑膜组织有异常增生。此外，在增生组织中有大量免疫细胞(嗜中性细胞、巨噬细胞、淋巴细胞)存在，可观察到产生抗体的B细胞的浆性细胞和辅助型T细胞聚集。到目前为止已明了免疫学上与作为疾病敏感性基因的HLA-DRB1等位基因相关。闭经前后的女性易发。此外，病理形态学上可见到病变部位(关节滑膜组织)有CD4阳性、CD45RO阳性的记忆性T细胞浸润，这表明对某种特定抗原有记忆的辅助型T细胞与疾病的发生密切相关。

目前RA治疗的中心是非类固醇类抗炎症剂、免疫调节剂和类固醇，但这些药物有各种副作用(胃肠障碍、肾功能障碍等)。免疫调节剂则有起效慢、连续施用出现无效性等问题。近年开始使用更能有效控制炎症的免疫抑制剂，但由于存在骨髓抑制等严重的副作用，所以迫切期望能开发出对病变部位特异的治疗手段。

作为对自身免疫性疾病特异的治疗手段，如可按照MS中提出的，从机体中去除对特定的自身抗原产生反应性的T细胞这一病因(例如使用T细胞疫苗)及对该抗原自身免疫耐受的由诱导等。为了将上述方法适用于RA、有必要鉴定RA相关自身抗原和对该抗原特异的T细胞，得到RA相关T细胞克隆。如果能得到这样的克隆，就能对与RA发病相关的T细胞受体(以下称作TCR)和编码它的基因进行分析能分离、鉴定该TCR所特异识别的抗原，进一步就有可能阐明T细胞活化的结制构及RA发病时的结构，最终就有可能开发出RA的治疗、诊断和预防方法。

但是由于没有RA相关的有效的动物模型，所以还未得到明确识别RA相关自身抗原的T细胞克隆，与RA发病相关抗原的鉴定也未进行，所以浸润CD4阳性记忆型T细胞与滑膜细胞与RA发病的关系也未明确。一般情况下，与特定抗原有反应性的辅助型T细胞克隆可这样建立：如在IL-2存在下持续给予抗原刺激，得到特别识别该抗原的T细胞株，在从这些细胞株用有限稀释法建立。但是由于未规定其抗原特异性(未给予特定的抗原刺激)，所以长期维持这些T细胞克隆非常困难。所以象RA这样未鉴定出与疾病相关的自身抗原的自身免疫性疾病，就不能按照上述方法建立RA特异的T细胞克隆。

发明的公开

本发明人们以提供与RA发病相关的、有增殖可能的T细胞克隆为目的进行了深入研究，建立了特异性识别RA患者滑膜细胞来源的抗原的T细胞克隆，阐明了其特性。

也就是说本发明所提供的T细胞克隆以HLA-DR限制性识别类风湿性关节炎患者滑膜细胞所表达的抗原。

本发明的T细胞克隆所识别RA相关抗原是以在特定的基因型HLA-DR上呈递为条件进行特异性识别，增殖的。

本发明的T细胞克隆包括识别HLA-DR4或HLA-DR9上所呈递的RA相关抗原的HLA-DR4或HLA-DR9限制性克隆。

此外分析本发明T细胞克隆的TCR区域的结果表明，TCR Vα链的CDR3区域有精氨酸，TCRβ链是Vβ6家族成员，或者TCRβ链包含Vβ12。

作为一种状态，本发明的T细胞克隆为CD4阳性且CD45RO阳性，在HLA-DR4或HLA-DR9的类风湿性关节炎患者的滑膜细胞存在下进行增殖。

本说明书中涉及T细胞克隆“有反应性”的时候是指某一T细胞克隆，体内和体外，在一定条件下能进行抗原特异性增殖。

“自身RA滑膜细胞”是指与特定的T细胞克隆相关过，与该克隆的供给源(RA患者的滑膜组织)相同的滑膜细胞。“非自身的RA滑膜细胞”是指由与特定的T细胞克隆的供给源不同的供给源而来的滑膜细胞。即。滑膜细胞“自身”或“非自身”的区别只依赖于供给源，因而“非自身RA滑膜细胞”中不只是与特定T细胞克隆基因型不相同的细胞，也包含有相同HLA-DR的细胞。