[发明专利]作为遗传物质转移系统的阳离子病毒体

权利要求书

1．带有正电荷脂双分子层膜的脂小泡，包括阳离子和/或聚阳离子脂质和至少一种在膜中整合的或者与膜共价连接的天然的或合成的病毒融合肽。

2．权利要求1的小泡，其中膜包含-以总的脂质为基础的-

(ⅰ)100％重量的阳离子和/或聚阳离子脂质；或

(ⅱ)90-95％重量的阳离子和/或聚阳离子脂质和5-10％重量的磷脂酰乙醇胺；或

(ⅲ)45-90％重量的阳离子和/或聚阳离子脂质，5-10％重量的磷脂酰乙醇胺和5-50％重量的磷脂酰胆碱。

3．权利要求1或2的小泡，其中

(ⅰ)阳离子脂质包括至少一种选自如下的脂质：氯化N-[(1,2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基铵(DOTMA),N-[(1,2,3-二油酰基氧基)-丙基]-N,N,N-三甲基氨甲基硫酸酯(DOTAP)；N-叔丁基-N’-十四烷基-3-十四烷基氨基丙酰脒；和

(ⅱ)聚阳离子脂质包括至少一种选自下面的脂质：1,3-二棕榈酰-2-磷脂酰乙醇酰氨基-精胺(DPPES)；二-十八烷基-酰氨基甘氨酰精胺(DOGS)；三氟乙酸2,3-二油酰基氧基-N-[2(精胺甲酰氨)乙基]-N,N-二甲基-1-丙烷铵(DOSPA)；1,3-二油酰基氧基-2-(6-羧基-精胺基)-丙酰氨(DOSPER)；和碘化N,N,N’,N’-四甲基-N,N'-双(2-羟基乙基)-2,3-二油酰基氧基-1,4-丁二铵(THDOB)。

4．前面一项或几项权利要求的小泡，其中融合肽选自：血凝素三聚体或单体，其一种或两种裂解的亚单位，糖肽HA1和HA2，从天然来源分离的融合肽，和合成的融合肽。

5．前面一项或几项权利要求的小泡，其中膜进一步包含至少一个细胞特异性标记和至少一种双功能交联剂，并且其中所述细胞特异性标记与所述膜通过所述交联剂连接。

6．权利要求5的小泡，其中所述细胞特异性标记选自单克隆抗体，F(ab’)₂片段，Fab’片段，细胞因子和生长因子。

7．前面一项或几项权利要求的小泡，进一步包含截留在所述小泡中的所需的遗传物质，优选选自短链DNA或RNA，脱氧核糖核苷酸，寡脱氧核糖核苷酸，寡脱氧核糖核苷酸硒酸盐，寡脱氧核糖核苷酸硫代磷酸盐，寡脱氧核糖核苷酸磷酰胺，寡脱氧核糖核苷酸甲基膦酸盐，肽核酸，核糖核苷酸，寡核糖核苷酸，寡核糖核苷酸硫代磷酸盐，2’-0Me-寡核糖核苷酸磷酸盐，2’-OMe-寡核糖核苷酸硫代磷酸盐，核酶，基因，质粒和载体。

8．前面一项或几项权利要求的小泡，其直径为120-180nm。

9．制备带有正电荷脂双分子层膜和至少一种病毒融合肽的小泡的方法，其中

a)将至少一种天然的或合成的病毒融合肽溶解于含有非离子去污剂的合适的缓冲液中；

b)将阳离子和/或聚阳离子脂质加入到溶液中并溶解；和

c)通过用聚苯乙烯微载体珠，优选Biobeads SM-2处理溶液而去除去污剂，导致生成含有所述正电荷脂双分子层小泡的悬浮液。

10．权利要求9的方法，其中

(ⅰ)阳离子脂质包括至少一种选自下面的脂质：氯化N-[(1,2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基铵(DOTMA),N-[(1,2,3-二油酰基氧基)-丙基]-N,N,N-三甲基氨甲基硫酸酯(DOTAP)；N-叔丁基-N’-十四烷基-3-十四烷基氨基丙酰脒；和

(ⅱ)聚阳离子脂质包括至少一种选自下面的脂质：1,3-二棕榈酰-2-磷脂酰乙醇酰氨基-精胺(DPPES)；二-十八烷基酰氨基-甘氨酰精胺(DOGS)；三氟乙酸2,3-二油酰基氧基-N-[2(精胺甲酰氨)乙基]-N,N-二甲基-1-丙烷铵(DOSPA)；1,3-二油酰基氧基-2-(6-羧基-精胺基)-丙酰氨(DOSPER)；和碘化N,N,N’,N’-四甲基-N,N’-双(2-羟基乙基)-2,3-二油酰基氧基-1,4-丁二铵(THDOB)。

11．权利要求9或10的方法，其中所述缓冲液是HEPES缓冲液，并且每毫升进一步含有10-250μmol所述的非离子去污剂，优选选自八乙二醇单十二烷基醚和正辛基-寡-氧基乙烯。