[发明专利]用于产朊假丝酵母转化的方法和材料无效
申请号: | 97199610.5 | 申请日: | 1997-10-03 |
公开(公告)号: | CN1237208A | 公开(公告)日: | 1999-12-01 |
发明(设计)人: | L·罗德里古茨密挪卡尔;F·P·萨威斯艾斯比挪萨;M·E·科萨雷茨马丁尼斯;T·里威罗巴易萨;L·比萨比图罗;E·帕菲雷仪斯;J·M·德加多伯阿达 | 申请(专利权)人: | 基因工程和生物技术中心 |
主分类号: | C12N15/81 | 分类号: | C12N15/81;C12N9/88;C12N9/26 |
代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 | 代理人: | 樊卫民 |
地址: | 古巴*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 产朊假丝 酵母 转化 方法 材料 | ||
1.一种用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所用的宿主酵母细胞能被重组DNA转化,并且该宿主细胞至少有一种生物合成途径的缺陷。
2.一种权利要求1的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中宿主酵母细胞至少在一种氨基酸的生物合成途径中有缺陷。
3.一种权利要求2的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所述宿主酵母细胞在尿嘧啶生物合成途径中有缺陷。
4.一种权利要求3的转化系统,其中所述宿主酵母细胞的乳清酸核苷5′-磷酸脱羧酶的酶活性有缺陷。
5.一种权利要求4的转化系统,其中所述宿主酵母细胞是产朊假丝酵母NRRL Y-1084CUT35(保藏号待定)。
6.一种权利要求2的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所用的宿主酵母细胞至少在组氨酸生物合成途径中有缺陷。
7.一种权利要求6的转化系统,其中该宿主酵母细胞的咪唑甘油磷酸脱水酶的酶活性有缺陷。
8.一种权利要求7的转化系统,其中所述宿主酵母细胞是产朊假丝酵母Y-1084TMN3。
9.一种权利要求1的转化系统,其中的重组DNA包含一种能互补宿主的生物合成途径缺陷的功能基因。
10.一种权利要求9的转化系统,其中所述功能基因是产朊假丝酵母的URA3基因。
11.一种权利要求10的转化系统,其中所述重组DNA是质粒pURA5和pUCURA3。
12.一种权利要求9的转化系统,其中所述功能基因是产朊假丝酵母的HIS3基因。
13.一种权利要求12的转化系统,其中的重组DNA是质粒pHCU37和pHCU40。
14.一种能用重组DNA转化的产朊假丝酵母宿主细胞,其中所述宿主至少有一种生物合成途径的缺陷。
15.一种权利要求14的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞至少有一种氨基酸生物合成途径的缺陷。
16.一种权利要求15的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞至少在尿嘧啶生物合成途径有缺陷。
17.一种权利要求16的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞的乳清酸核苷5′-磷酸脱羧酶的酶活性有缺陷。
18.一种权利要求17的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞是产朊假丝酵母NRRL Y-1084CUT35(保藏号待定)。
19.一种权利要求15的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞在组氨酸生物合成途径有缺陷。
20.一种权利要求19的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞的咪唑甘油磷酸脱水酶的酶活性有缺陷。
21.一种权利要求20的酵母宿主细胞,其中它是产朊假丝酵母(NRRL Y-1084)菌株TMN3。
22.一种能转化产朊假丝酵母的酵母宿主细胞的重组DNA材料,其中所述重组DNA材料包含一种能互补宿主的生物合成途径缺陷的功能基因。
23.一种权利要求22的重组DNA材料,其中的功能基因是产朊假丝酵母的URA3基因。
24.一种权利要求23的重组DNA材料,其中重组DNA材料是质粒pURA5以及pUCURA3。
25.一种权利要求22的重组DNA材料,其中的功能基因是产朊假丝酵母的HIS3基因。
26.一种权利要求25的重组DNA材料,其中的重组DNA材料是质粒pHCU37和pHCU40。
27.一种用于产朊假丝酵母转化的方法,其包括:
(a)用碱金属盐处理产朊假丝酵母宿主菌株;
(b)在适于转化的条件下用重组DNA材料接触步骤(a)的细胞产物;
(c)在合适的条件下进行酵母菌宿主菌株的电穿孔;
(d)在选择性的条件下将步骤(c)中的细胞产物接种于培养基。
28.如权利要求27的方法,其中步骤(a)中所用的碱金属盐是浓度为50mM的醋酸锂。
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