[发明专利]用于产朊假丝酵母转化的方法和材料无效

专利信息
申请号: 97199610.5 申请日: 1997-10-03
公开(公告)号: CN1237208A 公开(公告)日: 1999-12-01
发明(设计)人: L·罗德里古茨密挪卡尔;F·P·萨威斯艾斯比挪萨;M·E·科萨雷茨马丁尼斯;T·里威罗巴易萨;L·比萨比图罗;E·帕菲雷仪斯;J·M·德加多伯阿达 申请(专利权)人: 基因工程和生物技术中心
主分类号: C12N15/81 分类号: C12N15/81;C12N9/88;C12N9/26
代理公司: 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 代理人: 樊卫民
地址: 古巴*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 用于 产朊假丝 酵母 转化 方法 材料
【权利要求书】:

1.一种用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所用的宿主酵母细胞能被重组DNA转化,并且该宿主细胞至少有一种生物合成途径的缺陷。

2.一种权利要求1的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中宿主酵母细胞至少在一种氨基酸的生物合成途径中有缺陷。

3.一种权利要求2的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所述宿主酵母细胞在尿嘧啶生物合成途径中有缺陷。

4.一种权利要求3的转化系统,其中所述宿主酵母细胞的乳清酸核苷5′-磷酸脱羧酶的酶活性有缺陷。

5.一种权利要求4的转化系统,其中所述宿主酵母细胞是产朊假丝酵母NRRL Y-1084CUT35(保藏号待定)。

6.一种权利要求2的用于产朊假丝酵母的转化系统,其中所用的宿主酵母细胞至少在组氨酸生物合成途径中有缺陷。

7.一种权利要求6的转化系统,其中该宿主酵母细胞的咪唑甘油磷酸脱水酶的酶活性有缺陷。

8.一种权利要求7的转化系统,其中所述宿主酵母细胞是产朊假丝酵母Y-1084TMN3。

9.一种权利要求1的转化系统,其中的重组DNA包含一种能互补宿主的生物合成途径缺陷的功能基因。

10.一种权利要求9的转化系统,其中所述功能基因是产朊假丝酵母的URA3基因。

11.一种权利要求10的转化系统,其中所述重组DNA是质粒pURA5和pUCURA3。

12.一种权利要求9的转化系统,其中所述功能基因是产朊假丝酵母的HIS3基因。

13.一种权利要求12的转化系统,其中的重组DNA是质粒pHCU37和pHCU40。

14.一种能用重组DNA转化的产朊假丝酵母宿主细胞,其中所述宿主至少有一种生物合成途径的缺陷。

15.一种权利要求14的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞至少有一种氨基酸生物合成途径的缺陷。

16.一种权利要求15的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞至少在尿嘧啶生物合成途径有缺陷。

17.一种权利要求16的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞的乳清酸核苷5′-磷酸脱羧酶的酶活性有缺陷。

18.一种权利要求17的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞是产朊假丝酵母NRRL Y-1084CUT35(保藏号待定)。

19.一种权利要求15的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞在组氨酸生物合成途径有缺陷。

20.一种权利要求19的酵母宿主细胞,其中所述宿主细胞的咪唑甘油磷酸脱水酶的酶活性有缺陷。

21.一种权利要求20的酵母宿主细胞,其中它是产朊假丝酵母(NRRL Y-1084)菌株TMN3。

22.一种能转化产朊假丝酵母的酵母宿主细胞的重组DNA材料,其中所述重组DNA材料包含一种能互补宿主的生物合成途径缺陷的功能基因。

23.一种权利要求22的重组DNA材料,其中的功能基因是产朊假丝酵母的URA3基因。

24.一种权利要求23的重组DNA材料,其中重组DNA材料是质粒pURA5以及pUCURA3。

25.一种权利要求22的重组DNA材料,其中的功能基因是产朊假丝酵母的HIS3基因。

26.一种权利要求25的重组DNA材料,其中的重组DNA材料是质粒pHCU37和pHCU40。

27.一种用于产朊假丝酵母转化的方法,其包括:

(a)用碱金属盐处理产朊假丝酵母宿主菌株;

(b)在适于转化的条件下用重组DNA材料接触步骤(a)的细胞产物;

(c)在合适的条件下进行酵母菌宿主菌株的电穿孔;

(d)在选择性的条件下将步骤(c)中的细胞产物接种于培养基。

28.如权利要求27的方法,其中步骤(a)中所用的碱金属盐是浓度为50mM的醋酸锂。

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