[发明专利]cdc25B基因的启动子,其制备及应用

说明书

本发明涉及cdc25B基因的启动子，寻找cdc25B启动子的方法，以及cdc25B启动子在制备药物中的应用。

细胞分裂分为连续的时期G₀或G₁，S，G₂和M。S期是DNA合成期；接着是过渡期G₂(G₂期)，依次接着是有丝分裂时期(M期)，在M期亲本细胞分成两个子细胞。休止期G₀(G₀期)或过渡期G₁(G₁期)位于M期和S期之间。

一组蛋白质激酶，即细胞周期蛋白／cdk复合物驱动了细胞分裂。这些复合物包括催化亚单位[细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk，例如cdk1，-2，-3，-4，-5，-6，-7或-8)]和调节亚单位，即，细胞周期蛋白(例如细胞周期蛋白A，-B1-B3，-D1-D3，-E，-H，或-C)。

不同的cdk复合物特定地在细胞周期的各个时期有活性，例如cdk复合物cdk4／细胞周期蛋白D1-3和cdk6／细胞周期蛋白D1-3在中G₁期，cdk复合物cdk2／细胞周期蛋白E在后G₁期，cdk复合物cdk2／细胞周期蛋白A在S期，和cdk复合物cdk1／细胞周期蛋白B1-3和cdk1／细胞周期蛋白A在G₂／M过渡期有活性。

细胞周期蛋白／cdk复合物的活性包括使直接或间接参与调节DNA合成和有丝分裂的蛋白质磷酸化，和随后活化或失活。

与它们在细胞周期中的功能一致的是，例如通过细胞周期蛋白的控制降解，通过抑制剂的细胞周期阶段特异性结合(如，p16^INK4A，p15^INK4B，p21^Cip1，p27^Kip1，p18^INK4C，p19^INK4D和p57)或通过活化(如，cdc25磷酸酶或cdk7／细胞周期蛋白H)或抑制(如，weel激酶)酶的修饰，一些细胞周期蛋白和cdk的基因定期地被转录和／或定期地被活化或受抑制(参见Zwicker和Muller，细胞周期研究进展，1，91(1995)；LaThangue，Curr．Opin．Cell Biol．6，443(1994)；MacLachlan等，Crit．Rev．Eukaryotic Gene Expr．，5，127(1995)的综述)。

较高等的真核细胞至少具有三个cdc25磷酸酶，名称为cdc25A，cdc25B和cdc25C。已经将这些磷酸酶基因的cDNA克隆并分析(Okazaki等，基因178，111(1996)；Galaktionow等，细胞67，1181(1991))。所有这三个磷酸酶在细胞周期中定期地出现。但是，这些cdc25磷酸酶的活化功能显然不同(Jinno等，EMBO J．13，1549(1994)；Honda等，FEBSLett．318，311(1993)；Hoffmann等，EMBO J，13，4302(1994))：

cdc25A主要在后G₁期表达并特定地通过活化cdk／细胞周期蛋白复合物调节从G₁期到S期的过渡(细胞周期的开始)；它本身受Myc(转录)和Raf(活性)的调节。cdc25B在cdk1的ATP-结合口袋中将酪氨酸(酪氨酸14和酪氨酸15)去磷酸化，从而导致它们的活化；另外，它受不依赖于cdk1的细胞周期蛋白B(1-3)的刺激并且它的表达在病毒(SV40或HPV)感染的细胞中受到下调和提高。cdc25C在cdk1的ATP-结合口袋中将酪氨酸(酪氨酸14和酪氨酸15)去磷酸化，从而导致它们的活化；它在G₂期特定地表达，并调节进入M期。