[发明专利]氨基酰化水解酶拆分混旋蛋氨酸制左旋蛋氨酸的方法

权利要求书

1、一种氨基酰化水解酶拆分混旋蛋氨酸制左旋蛋氨酸的方法，其特征步骤是：

(1)将乙酰混旋蛋氨酸加去离子水配兑成0.4-1.0mol/L的底物溶液，用NaOH溶液调pH到2-9，过滤于拆分釜中按每3000ml过滤底液加100-150mlCoCl₂5×10^-4mol/L的溶液，

(2)取氨基酰化水解酶按17000-20000u/M乙酰混旋蛋氨酸比例加入上述过滤液底物中，在10-4℃保温40-110小时进行混旋蛋氨酸拆分，

(3)拆分液升温到80-90°加入活性炭脱色，过滤，

(4)脱色过滤液在70-80℃浓缩到原液体积的1／20-1／30后冷却，

(5)加入CH₃OH，其量为底物重量6-8倍，搅拌，于0-6℃下结晶3-6小时，离心分离，干燥得产品。

2、如权利要求1所述的制取左旋蛋氨酸的方法，其特征是底物溶液用NaOH溶液调pH到3.8-8。

3、如权利要求1所述的制取左旋蛋氨酸的方法，其特征是过滤底物中加入氨基酰化水解酶后，在温度20-38℃保温40-110小时进行混旋蛋氨酸拆分。

4、如权利要求1所述制取左旋蛋氨酸的方法，其特征是所述的乙酰混旋蛋氨酸的配制步骤如下：

(1)取1份重量的混旋蛋氨酸，加入到有2份重量冰醋酸的反应釜中，边加入边搅拌，

(2)往(1)中滴加0.9份重量的醋酐，同时搅拌，待放热反应完毕，

(3)冷却，同时加入2份重量的水，放置冷却20小时以上进行结晶，

(4)结晶分离、洗涤、干燥得m、p114-115℃乙酰混旋蛋氨酸产品。

5、如权利要求1所述的制取左旋蛋氨酸的方法，其特征是所述的氨基酰化水解酶，按如下步骤制得的，

(1)取1份重量的新鲜动物内脏在0-6℃下蘑成细浆，置于容器中，

(2)向细浆中加入2-3份重量0.05-0.1M浓度的磷酸钠盐缓冲液，在0-5℃下搅拌浸提30-40min，

(3)浸提液混合置于冷冻离心机中于转速3000rpm，温度0-5℃下离心沉降≥20min，收得蛋白浓度为40-45mg/ml，酶活力为1860-3890u/ml上清液，

(4)将(3)所得上清液用0.05-0.1M浓度的磷酸钠盐缓冲液调pH到3-8，然后再置于冷冻离心机中在转速3000rpm，温度0-5℃下离心沉降≥20min收集其上清液，

(5)将(4)所得上清液用0.05-0.1M浓度的磷酸钠盐缓冲液调pH到3-8，收得蛋白浓度为11-28mg/ml，酶活力1950-3380u/ml的上清液，

(6)往(5)所得上清液中按每份内脏重量的1/4-1/2重量加入(NH₄)₂SO₄粉末，存于冰柜中盐析-20小时，

(7)盐析液置于冷冻离心机中于转速4000rpm，温度0-5℃下离心沉降≥20min，得盐析沉降物，

(8)盐析沉降物用去离子水溶解并装入市售透析膜制成的袋中，于0-5℃下透析≥12小时，经常更换去离子水，检查透析液中无SO₄^-2离子时止。

(9)盐析所得透析酶液用0.05-0.1M浓度的磷酸钠盐缓冲液配成蛋白浓度为8-10Mg/ml，酶活力为23000-25000u/ml的酶液，置于冰柜中备用。

6、如权利要求5所述的制取左旋蛋氨酸的方法，其特征是所述的氨基酰化水解酶的制取中所用的浓度为0.05-0.1M的磷酸钠盐缓冲液为磷酸氢二钠与磷酸二氢钠溶液配制成的缓冲液。