[发明专利]一种蜗牛酶的制备方法

说明书

本发明是一种从动物废弃脏器中提取回收蜗牛酶制剂的方法。

自从蜗牛人工饲养供人们作为美味佳肴后，蜗牛的内脏等下脚料一直未有被利用，长期以来蜗牛的下脚料丢弃不用，既浪费了资源，又污染了环境。虽然也有用蜗牛下脚料烘干作饲料用，但是利用率太低，远未发挥其应有的作用，十分可惜。如何发挥富有营养价值的蜗牛其下脚料的营养价值，使其物尽其用，事半功倍是人们一直寻求的目标。

本发明的目的是发明一种工艺简单、利用率高的提取蜗牛酶的方法，本发明生产蜗牛酶的方法如下：

(1)蜗牛取来饿养2∽5天，尽可能排泄掉体内食物，洗尽蜗牛体表污泥和排泄物；

(2)用简易装置研散或敲散外壳，分离外壳，取出可食用的蜗牛肉；

(3)收集下脚料中胃、嗉囊和肝脏部分，放入预冷至2∽8℃的玻璃杯中；

(4)用高速匀浆器或绞肉机绞碎胃等内脏；

(5)用醋酸盐、磷酸盐、tris等缓冲液在2∽8℃冰箱中搅拌2～3小时提取蜗牛酶；

(6)在上述温度范围内的离心机中以8000～12000转/分，离心20～30分钟，上清液放于4℃冰箱保存。为了充分提取蜗牛酶，沉淀部分再以一倍内脏浆液体积的缓冲液，同上方法重复一次。

(7)合并两次离心液，用0.45Ц过滤器过滤除菌。沉淀部分可做饲料使用；

(8)除菌液在-30℃冰箱冰冻两天，然后转入-30℃的冷冻干燥器中制成冻干品；

(9)冻干品适当磨散，按需要分装，在-18℃冰箱保存。

本发明的制备方法中，酶的提取液是缓冲液，但是以NaH₂PO₄H₂O和NaHPO₄·2H₂O为好，提取效果好，后处理方便，更易操作。

上述缓冲液的用量以内脏浆液体积的1∽4倍为好，缓冲液少了提取效果不高，多了造成浪费，且使后道工艺费时费力，增加了制备成本。

缓冲液NaH₂PO₄·H₂O和Na₂HPO₄·2H₂O的浓度分别是20.0-26.0g/L和2.00-3.00g/L，其余是水。

本发明用离心机的离心速度是8000-12000转/分，离心后能有效分离酶液和杂质。

本发明方法简便，易工业化生产，所用试剂和设备均为常规物品，对建立工业化生产容易为企业接受。本发明方法制得的蜗牛酶经测试，结果表明其活性与标准蜗牛酶基本相同，且其中的淀粉酶，纤维素酶和果胶酶都保留着相当高的活性，以一公斤蜗牛8元计算，则一公斤蜗牛留下的下脚料制成的蜗牛酶可得60元左右。因此本方法是提取蜗牛酶后，再进行饲料加工，不仅清洁了环境，还大大提高了蜗牛下脚料的有效利用率，取得良好的社会效益和经济效益。

本发明蜗牛酶的测定方法如下：

采用酵母菌细胞的显微镜计数方法测定蜗牛酶活性相对值。

取酵母菌培养液1.5毫升，离心收集菌体，以一定量的标准蜗牛酶作破壁处理，其中一半在再生培养基(A)上生长，另一半在非再生培养基(B)上生长，酵母菌菌落之差为破壁数。以相同量自制蜗牛酶在相同条件下测定，同样计算破壁数。对两者的破壁数作比较，以标准蜗牛酶的破壁数为标准，计算自制蜗牛酶的相对活性。每个实验重复三次。如有一次实验结果是：标准蜗牛酶的破壁数为(83,97,89)/皿，平均89.7，自己提取的蜗牛酶破壁数为(92,86,94)/皿，平均90.7。结果表明，自制的蜗牛酶其活性与标准蜗牛酶基本相同。

实施例：(以实验室生产蜗牛酶为例)

(1)蜗牛取来后饿养2天，尽可能排泄掉体内食物，洗尽蜗牛体表污泥和排泄物。

(2)敲散外壳，并分离外壳，取出可食用的蜗牛肉。

(3)收集下脚料中的胃、嗉囊部分，放入预冷的玻璃杯中。

(4)用高速匀浆器匀浆胃等内脏。

(5)用两倍内脏匀液体积的缓冲液，在4℃冰箱中搅拌3小时提取蜗牛酶。

(6)在4℃离心机中以10000转/分，离心25分钟，上清液放于4℃冰箱保存。沉淀部分再以1倍内脏匀浆液体积的缓冲液，同上方法再重复一次。

(7)合并两次离心液，用0.45Ц过滤器过滤除菌。沉淀部分可做饲料使用。

(8)除菌液在-30℃冰冻两天，然后转入-30℃的冷冻干燥器中制成冻干品。

(9)冻干品适当磨散，按需要分装，在-18℃冰箱保存。